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(無題) 削除/引用 No.7893-4 - 2019/05/16 (木) 10:24:50 - AA やはりコスト面では圧倒的にプラスミドを使用する方法が優れています。 それなりに財政的に余裕がないと、合成RNA+リコンビナントCas9での実験は厳しいと思います。 一方で、RNPをトランスフェクションする方法のほうがプラスミドを入れるよりも 効率よく改変を行える印象があります。 特に、実験がそれほど上手じゃない人ほど顕著に差が出ます。 (手慣れている人はどちらでも十分な結果が出る、とも言えますが) sgRNAを自分でIVTするのであれば、よくMEGAscriptキットがよく使われています。 ただ、それなりに高いですし、合成RNAとして外注してしまうのもおすすめです。 IVTするのであれば結局一度クローニングしないといけないので pX459か458を入手しておくことをおすすめしますが。

(無題) 削除/引用 No.7893-3 - 2019/05/15 (水) 23:05:19 - んん 羊土社のゲノム編集プロトコールという本を買ってください。 addgeneのpx459プラスミドを使用する方法が載っています 。 多くの論文で使用されている方法です。

(無題) 削除/引用 No.7893-2 - 2019/05/15 (水) 21:52:15 - え こりゃだめだ…プラスミドの方が安くてシンプルでしょ

CRISPR/Cas9を用いたKO細胞の作製 削除/引用 No.7893-1 - 2019/05/15 (水) 18:52:40 - cherish はじめまして。 CRISPR/Cas9を用いて、HepG2細胞中のある因子のノックアウトを行おうと考えております。ゲノム編集は初心者です。 プラスミドを用いる方法もありますが、Cas9タンパク質とガイドRNAをそのまま導入しようと考えております。ですが、実際、どちらが良いのかよくわかりません。論文などではプラスミドが多い気がします。しかし、方法が簡単で比較的安く済みそうなので、タンパク質そのままの方を選ぼうと思いました。何かデメリットなどご存知でしょうか。また、良いガイドRNA作成キットなどございましたら教えていただけると助かります。 よろしくお願い致します。

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