Bio Technical フォーラム

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蛍光免疫染色 MRP3がApicalに染まる トピック削除
No.7894-TOPIC - 2019/05/16 (木) 01:00:19 - hitoshi
蛍光免疫染色を行っている者です。
おおよそ文献通りに実験を行なっているのですが、その文献通りにBasolateralが染まらず、Apicalがハニカム状に染まってしまいます。
条件は以下の通りです。
固定:1% PFA 15min
透過:0.1% Triton X-100 10min
ブロッキング: 3% BSA 60min
一次抗体: M3-U9 60min
二次抗体: goat anti mouse Alexa fluor 647 60min
何かわかる方がいればよろしくお願いします。
　
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No.7894-5 - 2019/05/17 (金) 18:38:37 - hitoshi
ありがとうございます。次回は提案して頂いた方法を試してみたいと思います。また見かけた際はよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用
No.7894-4 - 2019/05/16 (木) 03:48:53 - ぴょんぴょん
一次抗体を4度で一晩インキュベートするということと、もし二次抗体が少なかったら希釈率を下げる、ということですかね。あとは顕微鏡観察するときにきちんとフォーカスする、レンズがきれいであることを確認する、くらいがパッと思いつきます。

(無題) 削除/引用
No.7894-3 - 2019/05/16 (木) 01:19:45 - hitoshi
一次抗体の動物種はマウスです。
また、記載し忘れていたのですが、Caco-2細胞を使用しています。

(無題) 削除/引用
No.7894-2 - 2019/05/16 (木) 01:07:16 - ぴょんぴょん
一次抗体の動物種は何ですか？

蛍光免疫染色 MRP3がApicalに染まる 削除/引用
No.7894-1 - 2019/05/16 (木) 01:00:19 - hitoshi
蛍光免疫染色を行っている者です。
おおよそ文献通りに実験を行なっているのですが、その文献通りにBasolateralが染まらず、Apicalがハニカム状に染まってしまいます。
条件は以下の通りです。
固定:1% PFA 15min
透過:0.1% Triton X-100 10min
ブロッキング: 3% BSA 60min
一次抗体: M3-U9 60min
二次抗体: goat anti mouse Alexa fluor 647 60min
何かわかる方がいればよろしくお願いします。
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