Bio Technical フォーラム

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SDSサンプルバッファーを加えたサンプルからTCA沈殿可能か否か トピック削除
No.8148-TOPIC - 2019/08/10 (土) 03:12:27 - SDS
タイトルの通りなのですが、細胞の培養上清(無血清培地)に6xSDSサンプルバッファーを加えボイルをしまして、ウエスタンを行ったところ、かすかにバンドが認められました。

サンプル量は1レーンあたり30マイクロリットルも乗せております。
逆に減らしてはどうか?というテクニックがあることは存じ上げておりますが、質問はSDSサンプルバッファーを加えた上清に10%でTCAを加え、アセトン洗浄でタンパク質を濃縮できないかお聞きしたいです。

そのようなご経験ありますでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.8148-4 - 2019/08/10 (土) 14:19:30 - 234
Triton X でSDS除去して再生する実験したとき知ったのだけれども、SDSにもいろいろあるらしくてどうしても不純物的SDS(ほんとのSDSとは構造が少しちがうらしい)が多少混在していて、そういうのが多い製品つかうとそれがほんとのSDSよりも蛋白質にものすごい強固にくっついて再生がうまくいかないらしい。まえに国内のどこかのメーカーのウェブサイトで見たけど長い年月を経ているので分からなくなったので興味あればさがして。なのでTCA沈殿でもSDSの可溶化能がのこってると沈殿しにくい気がするから、純度の高いSDSつかったほうがいいとおもう。

(無題) 削除/引用
No.8148-3 - 2019/08/10 (土) 07:29:46 - SDS
安心しました。ありがとうございました。早速行なってみます。

(無題) 削除/引用
No.8148-2 - 2019/08/10 (土) 05:39:59 - おお
できます。あります。

SDSサンプルバッファーを加えたサンプルからTCA沈殿可能か否か 削除/引用
No.8148-1 - 2019/08/10 (土) 03:12:27 - SDS
タイトルの通りなのですが、細胞の培養上清(無血清培地)に6xSDSサンプルバッファーを加えボイルをしまして、ウエスタンを行ったところ、かすかにバンドが認められました。

サンプル量は1レーンあたり30マイクロリットルも乗せております。
逆に減らしてはどうか?というテクニックがあることは存じ上げておりますが、質問はSDSサンプルバッファーを加えた上清に10%でTCAを加え、アセトン洗浄でタンパク質を濃縮できないかお聞きしたいです。

そのようなご経験ありますでしょうか?

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