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(無題) 削除/引用 No.8165-3 - 2019/08/17 (土) 01:14:54 - おお レスがつかないですが、なぜだかわかりますか？ どんな細胞とも想像がつかないので（哺乳動物系、それとも、、、）、グルコースに対する反応も推測しようがないし、b-galのプロモーターがなにかもわからないし（哺乳動物系などならCMVかSV40かな）、具体的アドバイスに行き着かないのです。 再現性ありますか？グルコース刺激がなければどうなりますか？

(無題) 削除/引用 No.8165-2 - 2019/08/16 (金) 16:00:16 - おお >ドミネガのレーンでグルコース応答が見られなくなるのが正解なのですが 正解が分かっている実験にどれほど意味があるのか、、、 ＞先輩が同じプラスミド（細胞は違う）で実験を行うとうまくいきます。 じゃあ手技などの確認などをかねて先輩の細胞でやってみてはどうでしょう。 あなたの使っている細胞と同時にやるとよりよいでしょう。

luc assay, b-galでの補正について 削除/引用 No.8165-1 - 2019/08/16 (金) 12:28:18 - no name luc assayにて、あるタンパクAの標的遺伝子の転写活性を測定する実験を行っています。細胞に�@空ベクター、�AタンパクAをコードするプラスミド、�BタンパクAのドミナントネガティブ体をコードするプラスミド　の３レーンでトランスフェクションし、グルコース刺激後に回収、lucを行っています。 ドミネガのレーンでグルコース応答が見られなくなるのが正解なのですが、b-galの吸光度の値が�@＞�A≧�Bの順で小さくなってしまい、補正したときに�Bレーンのluc活性が高くなってしまう状況です。 �@と�A、�Bの吸光度は二倍くらい値が違います。また、先輩が同じプラスミド（細胞は違う）で実験を行うとうまくいきます。 b-galの値がぶれる原因が分からなくて困っています。どなたかご教示いただければ幸いです。

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