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(無題) 削除/引用 No.8297-6 - 2019/10/09 (水) 08:06:10 - ああ RFPとPEってそもそも被るから綺麗にわけれないんじゃないの？

(無題) 削除/引用 No.8297-5 - 2019/10/05 (土) 03:37:01 - おお FACS-canto�UでRFPを見ている論文はある程度は見つかりますね。セッティングは書かれてなかったですけど。４８８で励起しても光るには光るでしょうけど、ベストのコンディションに比べるとかなり弱いみたいですね。ターゲットの発現量が強ければなんとかなるのかもしれません。 https://www.researchgate.net/figure/Normalized-measured-SPDs-at-the-camera-film-at-different-excitation-wavelengths-for-GPF_fig2_277060855 こちらでは４８８励起でRFPというのが書いてますけど https://www.hpi-hamburg.de/fileadmin/downloads/Textmaterial_allg/TD_BD_FACS_Canto_II.pdf ＞蛍光強度がよわく、データの信ぴょう性にかける感じがします。 よくわかりませんが、蛍光がないものでネガコンをとってみたらどうなんでしょう。その設定で絶対引っかからないセッティングでちゃんと見れるならと思いますが。 あとはテクニカルにはBDに問い合わせるといいと思いますが。

(無題) 削除/引用 No.8297-4 - 2019/10/05 (土) 03:29:53 - み >[Re:1] 学生くん　初心者さんは書きました : > 当方の大学にあるものは488 633 405nm の3レーザーですが、そもそもこの状態でRFPをきれいに分離するのは無理なのか、 その波長では励起555nmのRFPは励起効率数パーセントだろうし、ほとんど蛍光発していないのでは？ RFPの励起波長の幅と最大蛍光波長の幅を調べて効率良く検出できる機器を使用しないと。

(無題) 削除/引用 No.8297-3 - 2019/10/05 (土) 02:07:08 - わからないけど > 当方の大学にあるものは488 633 405nm の3レーザーですが、 この3つのレーザーでRFPを解析するのでしたら使うのは488nmですよね。蛍光は532nmとか562nmのレーザーよりかは弱めになるのかな。 > RFPをPEのフィルターでみているのですが蛍光強度がよわく、データの信ぴょう性にかける感じがします。 PEのフィルターはどんなフィルターでしょうか？Wavelengthやバンドパスは？ 532nmとか562nmのレーザーが入っているサイトメトリーがあるのでしたらそっちを使うほうが早いかも？

(無題) 削除/引用 No.8297-2 - 2019/10/05 (土) 01:19:41 - わからないけど >[Re:1] 学生くん　初心者さんは書きました : > 当方の大学にあるものは488 633 405nm の3レーザーですが、 532nmとか562nmのレーザーがあるとよさそうですね。

RFP 　フローサイトメーター 削除/引用 No.8297-1 - 2019/10/05 (土) 00:37:31 - 学生くん　初心者 RFPでタグ付けされた或るたんぱく質をFACS-canto�Uで解析をしていますが、うまくいきません。→RFPをPEのフィルターでみているのですが蛍光強度がよわく、データの信ぴょう性にかける感じがします。 ある本を読むと、RFPはgreenレーザーなどを使わないとうまく分離できない可能性が指摘されていますした、論文などを読むとうまくRFPをうまく分離できてきるものも多数見かけます。こういった論文はgreenレーザーを使用しているものなのでしょうか。 当方の大学にあるものは488 633 405nm の3レーザーですが、そもそもこの状態でRFPをきれいに分離するのは無理なのか、ほかの機器を使用したほうがいいのか、どなたかご経験などあるかたいればお教えいただければ幸いです。 初心者であり　いたらぬところもあるかもしれませんが情報をいただければ幸いです。

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