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(無題) 削除/引用 No.9270-8 - 2020/11/02 (月) 15:41:19 - み >[Re:6] ど素人さんは書きました : > Annexin V が向かない細胞ということになると、caspase-3などを調べることになるのかもしれませんね。FACSでcaspase-3/7を調べる製品もあるようです。 トピ主が現れないから何とも言えんけど、FACS検出自体に不向きな場合、特に接着細胞に多く当てはまると思うけど、Caspase-Gloなど他の検出に切り替えた方がすんなりいくと思う。

(無題) 削除/引用 No.9270-7 - 2020/11/02 (月) 14:23:09 - G25 >まず、一切標識していない、もとの細胞そのものでAnnextin V陽性になるということは、ありえません。 >そこが陽性にみえる、のようにおっしゃっているのだとすると 素直に読んで、そうは言っていないと解したけれど。 コントロールの細胞(未処理の生存細胞)とは、アポトーシス誘導をかけていない細胞にAnnextin Vをふりかけたってことだよね。

(無題) 削除/引用 No.9270-6 - 2020/11/02 (月) 13:04:19 - ど素人 Annexin V が向かない細胞ということになると、caspase-3などを調べることになるのかもしれませんね。FACSでcaspase-3/7を調べる製品もあるようです。 https://www.thermofisher.com/jp/ja/home/life-science/cell-analysis/flow-cytometry/flow-cytometry-assays-reagents/apoptosis-assays-flow-cytometry/caspase-assays-flow-cytometry.html

(無題) 削除/引用 No.9270-5 - 2020/11/02 (月) 10:24:39 - み トリプシン処理と書いてあるから接着細胞を相手にしているのだろうけどAnnexinVは接着細胞には不向きじゃないかな。非特異的結合が洗浄できてないだけじゃないかな。 Annexinだけじゃなく抗体を用いても接着細胞をFACSで陽性陰性判定することは血球系細胞に比べると難しいと思う。

(無題) 削除/引用 No.9270-4 - 2020/11/02 (月) 09:03:00 - ど素人 まず、一切標識していない、もとの細胞そのものでAnnextin V陽性になるということは、ありえません。 そこが陽性にみえる、のようにおっしゃっているのだとすると、まずフローサイトメーターの設定からしっかりできていないということになります。 まず、一切未標識の細胞でシグナルがだいたい 10の3乗以下にくるように設定して、それから標識した細胞を観察しましょう。 フローサイトメトリーは意外と難しいですから、本当によく理解している人がいないと思わぬ苦労をすることがあります。

(無題) 削除/引用 No.9270-3 - 2020/10/31 (土) 08:47:36 - qPCR FITC-annexin Vはネガコンが置けませんので、FITC-annexin Vが推奨濃度以上でないか確認してください。 それから、細胞を明かせるようでしたらご提示された方がいいと思います。 中には恒常的または活性化することで膜上にPSが出ているものもありますので。

(無題) 削除/引用 No.9270-2 - 2020/10/31 (土) 06:43:02 - おお データーも見れないのでなんとも言いようがありませんが、ポジコンはとっている？

アネキシンVアッセイで全てにアネキシン陽性が出てしまう。 削除/引用 No.9270-1 - 2020/10/30 (金) 14:51:53 - celll アネキシンV-FITCを使用したアポトーシス測定をセルソーターにて行なっているのですが、どうしてもコントロールの細胞(未処理の生存細胞)もアネキシン陽性の反応が出てしまいます。 トリプシン処理など何かコツがありましたら教えていただきたいです。

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