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(無題) 削除/引用 No.9410-10 - 2021/01/05 (火) 16:24:39 - おお ちなみに組織はどのように調製したのですか？

(無題) 削除/引用 No.9410-9 - 2021/01/05 (火) 16:22:45 - おお マニュアルをみてみました。H2O2Standard CurveでH2O2なしのとき、RFUで１０００弱でこれはおそらくキットについているDCFの５００nMのシグナルに近い値。RFUはマシーンや測定条件で違うので、１０００でなくてもでなくてもいいが、DCFの５００nMの値ぐらいは出てしまうとおもっていいでしょう。 PBSで強い蛍光がでて、そのPBSでH2O2を希釈したものがそれより低い値が出るというのが少しげせない。いちどH2O2を用意しないで、新しいボトルからPBSをよういしてPBSオンリーでその試薬を入れてはかってみてはどうでしょう。おそらく高濃度H2O2から用意したりするとともうので、微量がはねて入ってしまっただけでも結構なシグナルにならないかとおもってしまう。H2O2は気体だからどれだけ揮発して近くのものに影響を与えるかわからないが、そのへんも考慮すべきなのだろうか（これに関してはほとんどそんな経験はないけど、むかしCO2インキュベーターで誰かこぼしていた培地をH2O2をかけたペーパータオルでふいたりしてたら、翌日その中の細胞が瀕死状態だった）。

(無題) 削除/引用 No.9410-8 - 2021/01/05 (火) 15:57:56 - ごんべえ そうですねえ。 「組織サンプル内のROSをクエンチする処理」ができれば適切なコントロールがおけるかもしれませんね。 あとは、外部からのROS添加等を組み合わせて添加回収実験的なことをやれば「その操作」の適切性は担保できるでしょう。 ちょっと落ち着いて考えてみると良いでしょうね。

(無題) 削除/引用 No.9410-7 - 2021/01/05 (火) 15:51:50 - 学部生J ごんべえさん ご返信ありがとうございます。 不可解なのが、″本来ROSを産生するはずの組織をPBSで希釈したもの″に対して″PBS″の方が強い蛍光を発した点です。inhibitする物質に対しての考察が必要そうです...。

(無題) 削除/引用 No.9410-6 - 2021/01/05 (火) 15:48:02 - 学部生J vhjkpさん ご返信ありがとうございます。 blankにPBSのみを入れて計測したところ、強い蛍光を発したということで間違いないです。しかし、これは本来ROSを産生するはずの組織を入れたものよりも強い蛍光であり、この組織の希釈も同じPBSを使用しているため、腑に落ちない状況であります。

(無題) 削除/引用 No.9410-5 - 2021/01/05 (火) 07:59:31 - ごんべえ 組織に使用とのことですが、今回のケースに関しては今ある情報を鑑みると当然「消光」については考慮に入れた方が良いと思います。 ある蛍光に対してenhanceするものinhibitする「もの」が存在します。 だからこそコントロールは単なるbufferで良いのか等を考えることが重要です。 この観点で考えて何か思い当たる節はありますか？これがなければ、他を考えなくてはいけませんね。

(無題) 削除/引用 No.9410-4 - 2021/01/05 (火) 01:56:24 - vhjkp 単純にPBSと試薬混ぜたらすごい光ったということでしょうか。PBSになんか混じってたのかもしれないですね。 とりあえずPBS新しく元から作り直してトライしてみて、ダメならメーカーに聞くという順番でですね。。

(無題) 削除/引用 No.9410-3 - 2021/01/05 (火) 00:53:23 - 学部生J 稚拙な文章で申し訳ありません。 blankにはPBSを入れて計測したところ、この蛍光がH2O2スタンダードを大きく上回るものであったため、困惑しております。

(無題) 削除/引用 No.9410-2 - 2021/01/04 (月) 18:07:14 - おお 実験系を理解してないので間違っていたら申し訳ないが、 ブランクはH2O2が入っていてCell lysatesとかCellsが入ってないということですか？それならH2O2はROSなのでそれが検出されたということになりますが。

In vitro ROS assay 光りすぎ問題について 削除/引用 No.9410-1 - 2021/01/04 (月) 13:11:01 - 学部生J Cell Biolabs Inc.　OxiSelect In Vitro ROS/RNS Assay を使用して、組織内ROSの測定を試みました。 当方、（測定したい組織よりも遥かに）H2O2のブランクがとても光ってしまいました。 考えられる原因などありますでしょうか？ また、同じような現象が見られた方いらっしゃいますか？

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