Bio Technical フォーラム

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GFP蛍光が出始めるタイミング トピック削除
No.9515-TOPIC - 2021/02/17 (水) 09:55:34 - GFP
CMVプロモータードライブのGFPベクターをトランスフェクションした時、細胞が光始めるのって何時間後くらいですか?
24時間で蛍光が観察できるのはプロトコールに書いてあるのですが、光始めるタイミングが知りたいです。
 
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(無題) 削除/引用
No.9515-6 - 2021/02/19 (金) 11:40:19 - asan

発現するまでのプロセスは様々な過程があるので一概にどこが律速かは細胞や導入の仕方によりますので厳密なことはケースバイケースです。

一般的に、

エレポ(核直接物理的に入れるので)>リポフェクション>ウイルス

って感じの速度だと思います。

特にエレポは早いものでは数時間で発現が見れます。

光り出すタイミング 削除/引用
No.9515-5 - 2021/02/17 (水) 10:56:04 - GFP
ご回答ありがとうございます。
光り出すのをタイムラプスで撮ろうと思ったのですが、システムの都合上12時間しか撮影できないのでお聞きしました。
参考になりました。

(無題) 削除/引用
No.9515-4 - 2021/02/17 (水) 10:50:52 - Nanasi
Transfection試薬によっても違うと思います。

Lipofectamineシリーズでは6時間か、場合によっては4時間くらいでも見えたけど
同じプラスミドをPEI MAXでやると6時間ではほとんど見えなかった経験があります

(無題) 削除/引用
No.9515-3 - 2021/02/17 (水) 10:07:58 - おお
培養室で細胞の蛍光をチェックするような簡易な蛍光顕微鏡で、リポフェくたミンで導入後、その日のうちに蛍光が見えているので、6、7時間あればその程度の感度で一部の細胞は検出レベルに達しているようです。リン酸カルシウム法ではもう少し遅いです。

そもそも検出できるかという問は検出感度が違えば答えが違うわけだから幾通りの回答があるだろうし、回答があなたのケースでは当てはまらないかもしれません。

それより、自身の環境で確かめてみる必要があるのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.9515-2 - 2021/02/17 (水) 09:57:49 - qq
Tet誘導のpCMVGFP(安定株)で5時間で検出できた記憶があります。
トランスフェクションから何時間となると、判らんなぁ。

GFP蛍光が出始めるタイミング 削除/引用
No.9515-1 - 2021/02/17 (水) 09:55:34 - GFP
CMVプロモータードライブのGFPベクターをトランスフェクションした時、細胞が光始めるのって何時間後くらいですか?
24時間で蛍光が観察できるのはプロトコールに書いてあるのですが、光始めるタイミングが知りたいです。

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