Bio Technical フォーラム

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測定値ーBGがマイナスの時。 トピック削除
No.9525-TOPIC - 2021/02/19 (金) 21:51:08 - い
血清の抗体価を知りたいと思いELISAしました。Negative control(免疫した抗原分子とは全然関係ないタンパク質(仮に偽抗原とします)を抗原の代わりにコート)について吸光度を測定したらBG(偽抗原コートなし)のwellがが0.085で偽抗原コートしたwellが0.075でした。なので測定値 が-0.010になります。つまり偽抗原とはほとんど反応してないのでそれはそれで良かったのですが、一応グラフ描きたいです、同じようにしたwellが4つあります。このうち2つが同じような感じでマイナスの値です。この場合このマイナスの値は0として良いのでしょうか。それともこの値で統計計算すべきなのでしょうか。抗原の方の吸光度(BG引いた後)は0.8前後なのでまとめてグラフ書くとnegative contの方は事実上棒グラフにはならないです。
 
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No.9525-4 - 2021/02/20 (土) 09:15:00 - qq
BGもブロッキングは行っているのですよね?
±0.01が有意な違いなのか判りませんが、有意に小さいとすれば、ブロッキングが不十分なだけで、negative-controlでブロッキングすべき(まあ、それは無理かもしれないけど)ということではないかな?

(無題) 削除/引用
No.9525-3 - 2021/02/20 (土) 05:49:45 - い
ありがとうございます。検討してみます。私たちは指導者に聞いてからデータを作成するような習慣がないので(仮に聞いてもあまりわからないため)自分らで勉強したり学内外のわかる人探して聞きながらやってます。全部出来上がってから実験の目的や方法、データの解釈を分かりやすく説明してあげるようにしています。

(無題) 削除/引用
No.9525-2 - 2021/02/20 (土) 01:28:32 - おお
負の値を0にしてしまったら、本来のばらつきが見れなくなってしまいますので統計的意味がなくなってしまいます。極端な場合全部負で、0にしてしまったらその実験のばらつきも見れない。
棒グラフにならないといいますが、一度書いてみたらどうでしょうか。値が負に触れようが、グラフは書いてくれます。それが嫌ならすべての値をプロットしたグラフを書けばいいでしょう。

もう一つ工夫するなら、ネガティブコントロールの最低の値をバックグランドとすれば、その値が0になってあとはすべて正になります(0になったものは、その測定で可能な限り非特異な吸着がなかったと解釈できるので)。グラフ上正に触れる図になります(このことが良いかは他の人の意見があればそれも聞いてみてください)。

それとここで聞くのがいいか悪いかはおいておいて、指導している人や、上司(といえる立場の人)に相談せずに勝手にデーターを作ってしまっていいものなのですか?まあ自分の考えを形にして示しながら相談するのならそれでもいいですけど。

測定値ーBGがマイナスの時。 削除/引用
No.9525-1 - 2021/02/19 (金) 21:51:08 - い
血清の抗体価を知りたいと思いELISAしました。Negative control(免疫した抗原分子とは全然関係ないタンパク質(仮に偽抗原とします)を抗原の代わりにコート)について吸光度を測定したらBG(偽抗原コートなし)のwellがが0.085で偽抗原コートしたwellが0.075でした。なので測定値 が-0.010になります。つまり偽抗原とはほとんど反応してないのでそれはそれで良かったのですが、一応グラフ描きたいです、同じようにしたwellが4つあります。このうち2つが同じような感じでマイナスの値です。この場合このマイナスの値は0として良いのでしょうか。それともこの値で統計計算すべきなのでしょうか。抗原の方の吸光度(BG引いた後)は0.8前後なのでまとめてグラフ書くとnegative contの方は事実上棒グラフにはならないです。

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