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(無題) 削除/引用 No.9592-6 - 2021/03/25 (木) 08:05:05 - おお 基本上向きですが、液量が少ないとなんだか膜の上に液がない（PVDFだから浮いてくる？）ような気がするときがあります。そういうときは下向きにすることがあります。ただ、ベッタっと張り付いているときは液が循環しているか不安なので、ピンセットで一旦持ち上げ液が下に入り込むようにしたりもします。 また、更に少ない抗体液を使うときはパラフィルムでカバーしてます。ただ、ベッタっと乗せずに、間に液が入り込むようにしてはいます。 ５０mlチューブに入れるのはいいアイデアですが、不器用でうまくチューブに入れることができませんので、、、 ノーザンやサザンなどのハイブリは５０mlのチューブじゃないけど、それより一回りぐらい大きなチューブにいれたりしましたが、１５cm x １５ cmぐらいの膜でも３mlあればハイブリで来たので、ほんとに貴重な抗体でとかの理由で液量を極力減らしたいなら５０mlのチューブも選択肢かなと思います。まあBagに入れるのも同様に節約できますが。

(無題) 削除/引用 No.9592-5 - 2021/03/24 (水) 21:40:08 - bvnm,kl;: どちらでもいいと思いますが、転写面を上にして、ハイブリバック に封入して反応させています。どちらが良いか知りたければ、試しに両方やってみて比べれば1日で答えが出ると思います。 洗浄の際は転写面は上にした方がよく洗えて良いように思います。

(無題) 削除/引用 No.9592-4 - 2021/03/24 (水) 14:39:35 - そも うちは50 mLチューブにメンブレンと抗体液5 mLを入れてローラーミキサーで転がしています。この時タンパクが乗ってる側を内向きにしています。

(無題) 削除/引用 No.9592-3 - 2021/03/24 (水) 13:24:34 - G25 振盪ができるくらいの液量を使っていて、うまくいっているならどちらでもいい。 抗体液を節約するために、パラフィルムやサランラップ、あるいはプラスチックトレイに少量垂らして、その上にブロット面を下にしたメンブレンをかぶせて静置する方法もある（もちろん乾燥しないように工夫する）。そういうときは当然、下向き。 逆に、メンブレンを上向きに置いてその上に少量の抗体液を乗せて、パラフィルム等をかぶせて静置するなんて方法もある。

(無題) 削除/引用 No.9592-2 - 2021/03/24 (水) 12:18:12 - ケチケチ うちのラボでは抗体（特に一次抗体）をケチるために、メンブレンと抗体溶液をプラスチックバッグに入れて熱シールしています。このままだとプラスチックバッグの折れや凹みでムラがでるので、その上から二枚のガラス板で挟んで平らにしてインキュベーションしています。

ウェスタンのメンブレン、下向き？上向き？ 削除/引用 No.9592-1 - 2021/03/24 (水) 11:57:21 - TS いつも勉強させてもらっています。 初歩的なことなんですが、時々気になることで教えてください。 ウェスタンブロットでメンブレンを抗体反応させるとき、 メンブレンのタンパク質が乗っている側を、上と下のどちらにしますか。 わたしは下向きにして、左右に振とうしています。 抗体液を節約していることもあり、下向きの方が安心な気がするためです。 理由も教えていただけると助かります。

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