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(無題) 削除/引用 No.5845-3 - 2017/03/17 (金) 09:15:42 - TS わたしは完全にバッファー内で組み上げます。 タッパーのようなものにたっぷりとバッファーを入れておいて（これは、前回転写に使ったバッファーの再利用です）、そのなかにスポンジやろ紙を沈めて十分に吸水させた後に、カセットを敷いて、それぞれを水中で積み上げて、ローラーやって、カセットを閉じます。 たまには気泡が残るけど、運悪く自分のタンパク質のところじゃなければOKだし。

(無題) 削除/引用 No.5845-2 - 2017/03/17 (金) 07:22:36 - しろ Gelを電気泳動している間にメンブレンを準備すると思いますが、トランスファーに使用するスポンジ、フィルター、メンブレンをトランスファーバッファーに浸して冷蔵庫に冷やしておきます。トランスファーバッファー自体は冷蔵にあるでしょうから一緒に。泳動が終わってゲルやメンブレンを重ねるときに冷えた状態のものでやると気泡が入りづらくなったと感じます。当方も以前気をつけていてもフィルムにしたときにバンドが丸く抜けててがっかりという経験があります。長いステップでやる実験なのでショックですよね。別の研究室でこの工夫をしていたのをマネしたところ、ほぼ気泡があるフィルムを出すことはなくなりました。同じプロトコールでしたらすみません。

ウエスタンブロットで転写後の気泡について 削除/引用 No.5845-1 - 2017/03/16 (木) 23:23:57 - ミミ 転写後のメンブレンをポンソーで染めると気泡でトランスファーがうまく行ってないことが時々あるのですが、どのようにしたら安定して実験することができるでしょうか？ 転写はウェットで行なっています。 ろ紙、ゲル、メンブレンを重ねる際はバッファーをかけて気泡をできるだけ除くように心がけていますがどうしても気泡が入ってしまいます。 全部重ねた後はローラーで軽く空気を除くように押し出しもしています。

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