Bio Technical フォーラム

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LR反応 トピック削除
No.2716-TOPIC - 2010/06/10 (木) 18:14:33 - M男
InvitrogenのpENTR/D-TOPOベクターに入っている目的断片をLR clonaseを用いてバイナリーベクターに組み換えようと思っています。しかし、pENTR/D-TOPOベクター、バイナリーベクター両方ともカナマイシン耐性のみなので、組み換えられなかったpENTR/D-TOPOベクターも大腸菌に形質転換されてしまいます。何かいい解決策はないでしょうか？たくさんのコロニーを調べるしかないでしょうか？
　
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No.2716-4 - 2010/06/10 (木) 18:47:57 - ザンギ
LR反応は直鎖DNAでも反応したと思います。
エントリークローンのベクター部分だけ予め制限酵素消化して直鎖にしておいてはどうでしょう。

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No.2716-2 - 2010/06/10 (木) 18:43:58 - masa
pENTR/D-TOPOを制限酵素処理してカナマイシン耐性遺伝子領域を切断、もしくは除去した状態で反応に用いてはどうでしょうか？

LR反応 削除/引用
No.2716-1 - 2010/06/10 (木) 18:14:33 - M男
InvitrogenのpENTR/D-TOPOベクターに入っている目的断片をLR clonaseを用いてバイナリーベクターに組み換えようと思っています。しかし、pENTR/D-TOPOベクター、バイナリーベクター両方ともカナマイシン耐性のみなので、組み換えられなかったpENTR/D-TOPOベクターも大腸菌に形質転換されてしまいます。何かいい解決策はないでしょうか？たくさんのコロニーを調べるしかないでしょうか？
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