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(無題) 削除/引用 No.2720-3 - 2010/06/17 (木) 13:42:23 - N.K 　アドバイスありがとうございます。早速試料を読みました。使える可能性もあるので、上司に相談しようと思います。返信ありがとうございました。

門外漢ですが 削除/引用 No.2720-2 - 2010/06/15 (火) 13:17:39 - ats Brij-35でリポソームは溶解することが確認されているなら、目的タンパクがアグって沈殿しているのしょう。界面活性剤を変えるか(同仁化学でお試しセットが販売されています）、NDSBを0.5~1M添加してみてはいかがでしょうか。 NDSB(非界面活性剤スルフォベタイン）はこの間の技術セミナーで紹介された物質で、MERCKで数種類販売しています。10ページほどの小冊子(pdfもあるようです）を読むと参考になります。

膜タンパク質の抽出 削除/引用 No.2720-1 - 2010/06/13 (日) 10:32:59 - K.N 状況： 　現在、あるトランスポーターが挿入されたプロテオリポソームがあり、そこから界面活性剤でトランスポーターを抽出 (可溶化) することを目的として、以下の操作を行っているのですが、全く可溶化しません。皆さんのアドバイスをいただきたいと思い、トピックを作製いたしました。 操作： プロテオリポソーム溶液に、界面活性剤 Brij-35 (CMC = 0.11 %) を0.5 × ~ 100 × CMC (ある程度の濃度間隔をあけています) になるようにそれぞれ加える ↓ 4℃, 1 hr 混和 ↓ 遠心 (12,000 rpm, 4℃, 30 min) ↓ 上澄み溶液と沈殿溶液に分け、SDS-PAGE。 ＊プロテオリポソームは上記の遠心条件で沈殿することが確認されています。 ＊トランスポーターが遠心後に上澄み溶液に分布していることを、"可溶化"としています。 ＊その後、界面活性剤 DDM, Fos Choline 14 で同じ条件にて上記の実験を行いました。 ＊リポソームの組成は大豆アゾレクチン (主成分 Phosphatidlycholine (PC)：SIGMA ) です。 問題： トランスポーターが上澄みに分布しない (可溶化しない) 。 いかがでしょうか。ぜひアドバイスをよろしくお願いいたします。

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