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(無題) 削除/引用 No.2873-7 - 2010/07/13 (火) 13:33:18 - AP >MgCl2を計測して加えて 再度オートクレーブにかけてしまうとPEMSのpH6.9がかわってしまうのでは ないかと思ったのですが・・・。 変わらないでしょう。 >その中で酵素による消化をした後の洗いの作業でPEMSという試薬を使います。 おそらくそこでPBSやリン酸バッファーなんかを使っても結果に大差はないと思います。多くの人がPBSでやっているステップをあまり大きな理由は見あたらないのにPEMに変更しているのもよく見ます。

(無題) 削除/引用 No.2873-6 - 2010/07/13 (火) 13:11:09 - erik 詳しい解説ありがとうございます。MgCl2を計測して加えて 再度オートクレーブにかけてしまうとPEMSのpH6.9がかわってしまうのでは ないかと思ったのですが・・・。 私のラボの組成でいくと、500ml中12.5mlのMgCl2を加え、終濃度としては 1Lで0.1mMです。 無視出来る程度かもしれませんね。 色々とお世話になりました（＾ｕ＾）

(無題) 削除/引用 No.2873-5 - 2010/07/13 (火) 12:55:15 - AP PEM buffer + sorbitolなんだとおもいますが、 PEM bufferならMg++濃度はたった0.2 mM、粉末試薬を計量してあとから加えることも出来るでしょうし、1 Mのストック溶液を加えるにしてもたった1/5000 volですから、終体積、終濃度にあたえる影響は無視できる程度です。それともこれとは組成が違うのかしら。 PEM bufferはいろいろな場面で使われるみたいですが（たとえば固定液）、EGTAはCa++を選択的にキレートしてのぞく作用があり、そこにMg++を加えているわけです。この二価カチオンの状態（フリーのCa++があまりなくて、Mg++が多い）は生体内に近く、そういう環境をもたらすための調合だと理解しています。

(無題) 削除/引用 No.2873-4 - 2010/07/13 (火) 12:16:30 - スケプティスト 後から足すわけにはいかないんですか？

(無題) 削除/引用 No.2873-3 - 2010/07/13 (火) 12:16:11 - erik 説明が足りなくてすみません・・・ 私は核内におけるpoly(A)の蓄積をin situ hybridizationにより観察しています。 その中で酵素による消化をした後の洗いの作業でPEMSという試薬を使います。 インターネットで調べたところラボによりMgCl2を使う所やMgSO4を使う所など様々あるようですがMgがキーなのかなと思い今回質問させていただきました。

(無題) 削除/引用 No.2873-2 - 2010/07/13 (火) 12:09:25 - in situ in situというのはin situ hybridizationですよね？ あと、PEMSというのはなんでしょう？PIPES(pH6.9)、EGTA、Mg、ソルビトールの略だとは思いますが。。 研究室ではメジャーな略語でも外部では通じないことが多々あるので、ちゃんと略さずに書くようにした方が良いと思います。 で、自分はRNAプローブを用いてRNAの局在を見るin situ hybridizationをしていますが、そのPEMSなる試薬を使うようなステップが思い当たりません。 どのステップで使う予定でしょうか？ それによってMgの役割が変わってきます。

in situ~PEMS作成でMの入れ忘れ~ 削除/引用 No.2873-1 - 2010/07/13 (火) 11:33:13 - erik 今in situを行うために試薬づくりをしています。 その中でPEMSを作ったのですが・・・ PIPES(pH6.9)、EGTA、ソルビトールはきちんと加えたのに MgCl2を入れ忘れてしまいました。 この試薬が有効か一度in situで試すつもりですが、in situにおいて このPEMS中のMgの役割と、Mgがないことの影響を教えていただければ幸いです。 よろしくお願いします。

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