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報告 削除/引用 No.227-7 - 2009/03/31 (火) 20:45:59 - jazzmessenger その後の報告です。USBのプロトコールにはPCR産物5uLに対し、SAP2uL、ExoI1uLと書いてありますが、半分量入れるだけで十分でした。怖くてまだ1/20〜1/40は試していません(笑)。二年ほど前に期限が切れたSAPなので心配していましが、まったく問題ありませんでした。

ありがとうございました 削除/引用 No.227-6 - 2009/03/26 (木) 02:04:31 - jazzmessenger 通りすがり様 度々有益な情報をありがとうございました。どんなバッファーでも結構いけるもんですね。 USBのSAPページでもPCRバッファーに直接入れるだけのプロトコールでした。http://www.usbweb.com/category.asp?cat=147&id=70092

(無題) 削除/引用 No.227-5 - 2009/03/25 (水) 09:07:41 - 通りすがり 市販のExo/SAP-ITを使用していますが、通常のPCRバッファーはもちろん、PrimerStarのいかにも色々入っていそうなバッファーでもちゃんと働いています。 最近では、1/20-1/40に水で(!)希釈して使っても大丈夫という話を聞いて、けちけち使っていますが、シーケンス用のテンプレート前処理に関しては今のところ全く問題ないですね。 参考になれば．．．

バッファー 削除/引用 No.227-4 - 2009/03/24 (火) 21:19:23 - jazzmessenger 通りすがり様、marron様、 早速のレスありがとうございました。 どちらのプロトコールもバッファーを追加していませんが、PCRバッファーで反応は十分ということでしょうか。USBのプロトコールにはそう書いてありますが、本当に大丈夫か気になっています。

組成 削除/引用 No.227-3 - 2009/03/24 (火) 14:07:47 - marron 昔はExoとSAPが別々のチューブに入って、PCR product pre-sequencing kit (US 70995)という名前で売られていました。これの説明書によると、5ulのPCR産物に対し、Exonuclease I (10u/ul) ,SAP (2u/ul)(マイクロリットル)をぞれぞれ1ulずつ入れて１５分反応となっています。私はSAPについては1uしか使っていませんが（購入したものが1u/ulだったので）問題はありません。 この商品は今も売られているようですね。 http://www.gelifesciences.co.jp/tech_support/manual/pdf/dnapcr/70995.pdf

(無題) 削除/引用 No.227-2 - 2009/03/24 (火) 09:17:05 - 通りすがり ここにあるのとかはどうですか？ http://genome.wustl.edu/activity/med_seq/protocols.cgi?id=206#TOP

ExoSAP-ITを自作 削除/引用 No.227-1 - 2009/03/24 (火) 05:40:25 - jazzmessenger 以前他のプロジェクトのために使用していたSAPが多量に余っています。そこで、Exonuclease Iだけ購入して、USB（今はAffymetrixになりましたが）のExoSAP-Itを自作したいと考えております。USBに電話をしましたが、当然SAP とExonuclease Iの量、バッファーの組成は教えてくれませんでした。私のラボは自作しているという方がいましたら、使用濃度等教えていただけませんでしょうか。よろしくお願いします。

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