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膵 TUNEL法 トピック削除
No.316-TOPIC - 2009/04/13 (月) 18:08:35 - 糖尿病研究室
マウスの膵のパラフィン切片でTUNEL法をやった方におたずねします。
TAKARAのアポトーシスキットを用いて何度か条件を変えて染色してみましたが、うまく染色されません。
マウスの膵で染色が成功した方がいらしたら、お勧めのキットなども教えていただきたいです。

・proteinase K 400μg/ml 5分で酵素処理
・ラベリング 37℃で90分
・抗体反応 30〜45分
・DAB 15分以上

よろしくお願い致します。
 
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ありがとうございました 削除/引用
No.316-3 - 2009/04/15 (水) 15:45:22 - 糖尿病研究室
早速のお返事ありがとうございます。
陽性コントロールは、染めてみました。
それは染色されていたんですが、マウスの膵は染色されませんでした。
やはりアポトーシスの誘導がされていないのかもしれませんね。
マウスの膵のTUNEL法で染色できていた論文があったので、解剖の時のやり方や、固定の仕方が間違っているかもしれません。
もう少し調べてみますね。
ありがとうございました。

> マウスの膵臓を Tunel で染めたことはありません、しかし組織の染め物の一般論ですが、陽性コントロール、陰性コントロールを置いていますか。アポトーシスの陽性コントロール組織は市販されています。また、腫瘍でもアポトーシスが誘導されていますので、それを染めて染まらなければ、技術的な問題があると考えます。
>
> もし、陽性コントロールが染まって、マウスの膵臓が染まらなければアポトーシスの誘導はされていない、という判断になると思います。 Tunel 染色自体はそんなに難しい方法ではありませんので、その確認を是非行ってみて下さい。

Re: 膵TUNEL法 削除/引用
No.316-2 - 2009/04/15 (水) 10:01:51 - tontan
マウスの膵臓を Tunel で染めたことはありません、しかし組織の染め物の一般論ですが、陽性コントロール、陰性コントロールを置いていますか。アポトーシスの陽性コントロール組織は市販されています。また、腫瘍でもアポトーシスが誘導されていますので、それを染めて染まらなければ、技術的な問題があると考えます。

もし、陽性コントロールが染まって、マウスの膵臓が染まらなければアポトーシスの誘導はされていない、という判断になると思います。 Tunel 染色自体はそんなに難しい方法ではありませんので、その確認を是非行ってみて下さい。

膵 TUNEL法 削除/引用
No.316-1 - 2009/04/13 (月) 18:08:35 - 糖尿病研究室
マウスの膵のパラフィン切片でTUNEL法をやった方におたずねします。
TAKARAのアポトーシスキットを用いて何度か条件を変えて染色してみましたが、うまく染色されません。
マウスの膵で染色が成功した方がいらしたら、お勧めのキットなども教えていただきたいです。

・proteinase K 400μg/ml 5分で酵素処理
・ラベリング 37℃で90分
・抗体反応 30〜45分
・DAB 15分以上

よろしくお願い致します。

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