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(無題) 削除/引用 No.319-4 - 2009/04/14 (火) 14:14:07 - kk CJ様 > おそらくSirius Redは脱色が足らないのだと思います。そして、fast greenは脱色が過ぎるのでしょう。１種類の色素の染色でうまく行っていますか？ それぞれ単色での染色を現在検討中です。染色後の脱水・封入のステップは特に意識していませんでした。一般的な70-100%EtOH,xyleneの順で行っています。この部分も検討してみたいと思います。 組織様 > 対比染色はともかく、まずはSirius Red染色がうまくいく条件を検討した方がいいでしょうね。陽性対照をおいてますか？ ポジコンは線維化が進んだ組織を用いています。 ただ、皮膚のような元々コラーゲンを多量に含むものを使ってみるのもいいのかもしれないですね。ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.319-3 - 2009/04/14 (火) 10:35:07 - 組織 対比染色はともかく、まずはSirius Red染色がうまくいく条件を検討した方がいいでしょうね。陽性対照をおいてますか？例えば皮膚とか、コラーゲン線維が豊富に存在する組織なら陽性像を判別しやすいと思います。

(無題) 削除/引用 No.319-2 - 2009/04/13 (月) 22:21:06 - CJ これらの染色法を試したことはありませんが、コメントを。 おそらくSirius Redは脱色が足らないのだと思います。そして、fast greenは脱色が過ぎるのでしょう。１種類の色素の染色でうまく行っていますか？ あと、fast greenって細胞質を染める染色なのですか？ちょっと手元にないのですが、緑色の色素で「細胞質を染めない」ものがあったので、気になります。

Sirius red染色による組織コラーゲンの解析について 削除/引用 No.319-1 - 2009/04/13 (月) 22:07:46 - kk 現在、組織の線維化の評価として、Sirius redを用いたコラーゲンの染色を行っているものです。 カウンター染色としてFast greenで細胞質を染めているのですが、いくつか問題点がありましてご相談させていただきました。 かかえている問題点は 1. Sirius red で切片全体が非特異的に染まる 2. 染色後の脱水でFast greenの染色がほぼ抜け落ちる です。 プロトコールは 0.1% Fast green (10min) ↓ 1%酢酸 (2min) ↓ 0.1% Sirius red (30min) ↓ エタノール・キシレンで脱水、封入 で行っており、濃度・時間はいくらか検討してみましたが、あまり効果はありませんでした。 解決策、他によいプロトコール等ご存知の方いらっしゃいましたら、ご教授いただけないでしょうか。よろしくお願いします。

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