Bio Technical フォーラム

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ウエスタンにおけるサンプル調整 トピック削除
No.3367-TOPIC - 2010/10/16 (土) 01:46:34 - 実験初心者
お世話になります。
基本的なことで申し訳ないのですが、ウエスタンでサンプルをゲルにアプライする際に、サンプルが異常に粘ちょうでピペットチップにくっついたまま離れません。ウェルに入れるのが困難で、うまくいきません。
reducing agentが粘ちょうなのでこのような現象が起きるのかと思い、70度で処理する前後にきちんとスピンダウンしています。reducing agentもsample bufferの量もほぼ間違っていないと思うのですが、何かアドバイス下さればありがたいです。
よろしくお願い申し上げます。
　
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No.3367-5 - 2010/10/16 (土) 09:22:02 - ats
benzonaseをSDS-sample bufferに1/1000(v/v)ほど添加すれば、数分でDNA/RNAが分解されてサラサラ？になります。ウエスタンブロット解析には精製度の高いものがよいでしょう。

(無題) 削除/引用
No.3367-4 - 2010/10/16 (土) 08:41:24 - おお
DNAに一票。細かく解説するのがめんどくさくって、、、
放置プレーってやつですか。。。

DNAが溶出しないマイルドな条件でライせーとを作るというのも選択しかとおもいます。

(無題) 削除/引用
No.3367-3 - 2010/10/16 (土) 05:21:51 - yyy
DNAで間違いないでしょう。

(無題) 削除/引用
No.3367-2 - 2010/10/16 (土) 03:12:12 - TS
サンプル由来のGenomic DNAのせいだと思います。
超音波処理か、シリンジに通して、DNAを断片化すると、
粘性がなくなります。

ウエスタンにおけるサンプル調整 削除/引用
No.3367-1 - 2010/10/16 (土) 01:46:34 - 実験初心者
お世話になります。
基本的なことで申し訳ないのですが、ウエスタンでサンプルをゲルにアプライする際に、サンプルが異常に粘ちょうでピペットチップにくっついたまま離れません。ウェルに入れるのが困難で、うまくいきません。
reducing agentが粘ちょうなのでこのような現象が起きるのかと思い、70度で処理する前後にきちんとスピンダウンしています。reducing agentもsample bufferの量もほぼ間違っていないと思うのですが、何かアドバイス下さればありがたいです。
よろしくお願い申し上げます。
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