いつも勉強させて頂いております。
以下の件で、お知恵を拝借できればと考え、投稿させて頂きました。
現在、KOマウスを用いて研究を行っております。in vivoでVLDL放出に影響が出たため、肝から調製した初代培養細胞でも同様の結果を得たいと考えております。細胞での実験は、後にレスキュー実験なども視野に入れているため、不可欠だと考えております。いくつかの論文を参考にして、実験を組み立てているのですが、放出量が非常に少なく困っております。経験がある方、おられましたら、プロトコルを御教授頂けないでしょうか。現在の方法を改善するより、スムーズに結果が得られるのでは考えております。
[現状]
・RIの取り込み時間を検討しましたが、2時間の取り込みでも、十分に細胞内にトリグリセリドとして蓄積されていました。
・にもかかわらず、その後、2時間、4時間（文献では、この程度でした）で、倍地中に放出されるトリグリセリド量は非常に微々たる物です。2時間から4時間で若干増加はしていましたが。
・RI取り込み、放出の間は、血清フリーです。
宜しくお願い致します。 |
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