Bio Technical フォーラム

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酵母の破砕 トピック削除
No.3557-TOPIC - 2010/11/22 (月) 11:58:21 - chikutan
いつも皆さんの質問・御意見ありがたく拝見させてもらってます。

現在、酵母を大量に培養して菌体内から
タンパクを抽出・精製をしているのですが
何か効率の良い破砕方法はないでしょうか?

これまでの手法としてはガラスビーズ破砕をしています。
Y-PERも試しましたが
培養時間が長いためか上手く抽出できず…
またタンパク自体も失活してしまいました(RT, 4℃でも同様)
Zymoriaseも条件的にはやりたくないと思っているのすが…
(35℃インキュベートが心配で)

スケールとしては 1 L培養分くらいを一気に処理したいのですが

何か良い案ありましたらよろしくお願いします。
 
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No.3557-8 - 2010/11/24 (水) 18:41:27 - chikutan
いろいろ御意見ありがとうございました。

とりあえず、所内でフレンチプレスのあるとこがないか
探してみます。
何せ隣は何をするラボ?みたいなトコなので
きっと何処かには眠っていることでしょう。

Coffee millというのも面白いですね。
これについてももう少し勉強してみようと思います。

(無題) 削除/引用
No.3557-7 - 2010/11/22 (月) 22:18:16 - と
フレンチプレスがそんな手間かからなくていいと思います

(無題) 削除/引用
No.3557-6 - 2010/11/22 (月) 19:44:42 - ぶん
SKミルがおすすめです。

http://www.tokken.jp/products/breaker/skmill.html

(無題) 削除/引用
No.3557-5 - 2010/11/22 (月) 19:01:44 - 弘法
1L分程度の量なら、coffee millを使う手もあります。"yeast liquid nitrogen coffee mill"で検索すると幾つも文献が見つかると思います。かなり丁寧に方法まで書いてあったと思います。

(無題) 削除/引用
No.3557-4 - 2010/11/22 (月) 18:53:29 - 弘法
菌体を少量のバッファーに懸濁後、液体窒素に滴下して凍らせ(この状態でディープフリーザーで保存できる)、これを液体窒素で冷やした乳棒/乳鉢ですり潰すか、ワーニングブレンダーで破砕する。なかなか大変ですけど。

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No.3557-3 - 2010/11/22 (月) 18:15:12 - ATGC
地域の自治体の産業技術センターみたいなところで使わせてくれるかもしれないよ。使用料とかは払うけど。たとえばhttp://www.kanagawa-iri.go.jp/kitri/riyou/setsubi/setsubi_ch.html 
ここの試料調製用機器のとこクリックしてみ。あるよ。

(無題) 削除/引用
No.3557-2 - 2010/11/22 (月) 12:15:26 - KCl
フレンチプレスはどうでしょうか?
ラボに装置がなくても、他のラボに聞いてみれば、どこかはもっているかと思います。

酵母の破砕 削除/引用
No.3557-1 - 2010/11/22 (月) 11:58:21 - chikutan
いつも皆さんの質問・御意見ありがたく拝見させてもらってます。

現在、酵母を大量に培養して菌体内から
タンパクを抽出・精製をしているのですが
何か効率の良い破砕方法はないでしょうか?

これまでの手法としてはガラスビーズ破砕をしています。
Y-PERも試しましたが
培養時間が長いためか上手く抽出できず…
またタンパク自体も失活してしまいました(RT, 4℃でも同様)
Zymoriaseも条件的にはやりたくないと思っているのすが…
(35℃インキュベートが心配で)

スケールとしては 1 L培養分くらいを一気に処理したいのですが

何か良い案ありましたらよろしくお願いします。

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