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(無題) 削除/引用 No.3589-4 - 2010/11/27 (土) 12:11:55 - 内川 >通りすがり様、ATGC様 アドバイスありがとうございます。 論文をみると、パラフィン切片だと精巣内の構造がきちんと保持されてる 感じがしました。自分自身も凍結切片を作ってみましたが、精細管内の 構造がやや崩れてる感じがしました。 しかし、他の論文をみると、凍結切片で染めてるデータも存在しました。 その論文は、精巣組織を4%PFAで一晩固定した後、20% sucroseに漬けて OTCコンパウンドで包埋していました。 私は組織を固定せずに包埋して切片を作ってましたので、その論文の やり方をまねてみようかと思います。 また、精細管内の細胞種の判定って訳ではなく、幹細胞を染めたいと 考えております。免疫染色での適応が、凍結切片の方がパラフィンよりも 優れるのならば、凍結切片でも大丈夫かと思いましたが、やはり精細管内の 構造がきれいに見えるに越したことはないですよね…。 うちにはパラフィン切片を作る機器が全くございません。 知り合いにパラフィン切片を作ってる方がいますので、その方に やり方を教わるのが早いかと思いました。 外注の手段も、検討したいと思います。 ありがとうございました。 また何かあれば教えて下さい。

(無題) 削除/引用 No.3589-3 - 2010/11/27 (土) 01:21:54 - ATGC 一般論だけど標本のきれいさではパラフィン＞凍結だけど、免疫染色への適用という点では凍結＞＞パラフィンだね。パラフィンだと賦活化処理とかしないとそもままでは免染出来ないことが多い。凍結はそうした処理なくてもいける事が多い。もし先行研究の人たちが何か意味があってパラフィンでやってるならば、たぶん精巣の場合は凍結だと見たい微細構造の保持が今イチだったのかもね。パラフィン切片で面倒なステップは組織の包埋処理だけど今はたいていは自動包埋装置でやるとおもうから、機器があればとくに問題なくできる。そのあとパラフィンブロック作るのに使う装置とかあったほうがいいけどあるかな。まあ凍結切片作成の経験があれば心配ない。初回だけ経験者といっしょにやれば次からは一人で出来と思っていい。取りあえず本読んで。必要な機器は共同機器室とか、もし医系ならば病理とか解剖の教室とか中央検査とかなら持ってると思う。まずそれを確認することだね。設備的にあれならば、数が多くないなら外注してしまった方がいいかもね。

(無題) 削除/引用 No.3589-2 - 2010/11/27 (土) 01:15:34 - 通りすがり 　精巣でパラフィンが好まれるのは形態上の理由と思います。凍結切片にすると、間質が保持されない（つまりなくなる）ため、精細管同士がばらばらになってしまい、写真が格好悪くなります。しかし、高倍率でひとつの精細管だけに着目した写真を撮るのであれば、そんなに問題はないと思います。 　ところで、精細管内の細胞種の判定って、核染色で可能ではなかったでしたっけ？（ずいぶん昔にやったので忘れましたが)

精巣組織の切片　パラフィン？ 削除/引用 No.3589-1 - 2010/11/26 (金) 22:43:41 - 内川 精巣組織内のスパマトゴニアを、抗体で染色したいの ですが、論文を見るとパラフィン切片で染色したデータが ほとんどです。 しかし、今まで凍結切片でしか切片を作ったことがなく、 パラフィン切片の作製方法が分かりません。 こういった場合、凍結切片でちゃんと抗体が染まれば問題ないのでしょうか？ 使用する抗体は、論文でも使われてる抗体を検討していますが、 論文通りパラフィン切片で染めた方がよいのでしょうか？

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