Bio Technical フォーラム

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EMSA トピック削除
No.3607-TOPIC - 2010/12/01 (水) 19:23:35 - LL
RI標識probeを用いたEMSAで得られた結果を、
DIG標識に変えて得ようと試みていますが再現できません
(RIが使用できない環境なので)。
同じ経験をされ、解決された方いますでしょうか?
 
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No.3607-7 - 2010/12/05 (日) 00:11:34 - LL
Probeを長くして試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.3607-6 - 2010/12/03 (金) 16:02:48 - Boston-Pullman
転写複合体でDIGがマスクされてしまうことは考えられますか?プローブを長めにしたら解決されるかもしれません。In situ でしかDIGを使った事がないので、思いつきを書き込みました。

(無題) 削除/引用
No.3607-5 - 2010/12/03 (金) 14:04:31 - LL
primer の5’をDIG標識したものでPCRを行い、
probeを調製しています。
感度は(free probe の検出具合)、RIとさほど変わらないかなと
思っています。

(無題) 削除/引用
No.3607-4 - 2010/12/03 (金) 09:13:25 - あべちゃん
確認ですが、ランダムプライミングやニックトラではなく、末端ラベルにしてますか?

(無題) 削除/引用
No.3607-3 - 2010/12/02 (木) 21:25:52 - DIGDUG
私はDIGラベルのEMSAしかやったことがありませんが、非常によくworkしています。よくDIGがRIより感度が低いと言われますが、そうかな?といつも思っています。単に私がRIを盲目的に避けているからかもしれませんが。

話を戻しますが、DIGでの検出は慣れていらっしゃいますか?rocheのキットのプロトコール通り行い、最後の発光だけCDP-starを使うと数十秒の露光で充分フリープローブだけでなくシフトバンドが検出できています。

(無題) 削除/引用
No.3607-2 - 2010/12/02 (木) 20:34:10 - 多分ですが
感度の問題じゃないでしょうか?
ほんの少ししかシフトしていないのでRIでは捉えられたけど
DIGでは捉えられなかったのではないでしょうか?

EMSA 削除/引用
No.3607-1 - 2010/12/01 (水) 19:23:35 - LL
RI標識probeを用いたEMSAで得られた結果を、
DIG標識に変えて得ようと試みていますが再現できません
(RIが使用できない環境なので)。
同じ経験をされ、解決された方いますでしょうか?

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