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(無題) 削除/引用 No.3619-3 - 2010/12/06 (月) 10:00:04 - 葉 二次元電気泳動時の還元アルキル化のプロトコールを使えばいいんじゃないですか？ 濃度はすぐアタマから出てきませんが、 50℃か65℃、30分〜60分遮光して処理してました。

(無題) 削除/引用 No.3619-2 - 2010/12/05 (日) 21:26:14 - pc DTTの場合だとモル濃度の4-5倍くらい入れます。メルカプトエタノールだとその半分ですね。反応はかなり早いので、室温でも10分くらいやれば十分です。たぶん1分でほぼ終わってるんじゃないかな。

ヨードアセトアミドを用いた還元アルキル化 削除/引用 No.3619-1 - 2010/12/04 (土) 14:16:35 - 蜜柑 いつも拝見させて頂いております。 還元アルキル化のプロトコールについてお聞きしたいのですが、どなたかご存知の方がいらっしゃればお答え頂ければ幸いです。 SDS-PAGEのおいて還元条件下泳動を行うと、モノマーに分かれるタンパク質がいます。おそらく、そのタンパク質はそのモノマーで構成されているポリマーなのですが、ゲルを染色するとポリマーと思われる高分子量のバンドが残っているので、完全にポリマーであると言い切れません。(ポリマー以外に別のタンパク質がいるかも？) ポリマーであることを確認するために、ヨードアセトアミドでＳＨ基をアルキル化して、再会合を防いでもう一度SDS-PAGEをやってみろと言われましたが詳しいプロトコールが分かりません。 流れは タンパク質＋還元剤入り泳動バッファー ↓ 上にヨードアセトアミドを加えてアルキル化させる なのは分かります。お聞きしたいのは２点です。 �@還元剤の量に比べてどの程度のヨードアセトアミドを加えるのか �A反応時間はどうするべきか 参考までに、還元剤はメルカプトエタノールを使っています。 よろしくお願いいたします。

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