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RT-PCRに使うポリメラーゼについて トピック削除
No.3635-TOPIC - 2010/12/07 (火) 16:53:21 - Camellia
RT-PCRに使うポリメラーゼについて質問させてください。
植物の培養細胞のRNAをcDNAにしたものをテンプレートに、ある遺伝子のRT-PCRを行っています。
ポリメラーゼはTaqを使いました。

予想される長さの位置にバンドが出たので、確認のためサブクローニングをすることになりました。
そこで、ポリメラーゼをEx Taqに変えてPCRを行ったところ、そのバンドは全く出なくなってしまいました。
使っているサーマルサイクラーは同じで、サイクル数を増やしてもバンドは出ません。
なにか考えられる原因と解決策はあるでしょうか。
よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.3635-3 - 2010/12/07 (火) 18:55:34 - ~
Ex Taqまたは他のDNAポリメラーゼで、PCRの条件を最適化する。

酵素やバッファーが変われば、同じ条件で殖えるかどうかは分かりません。

(無題) 削除/引用
No.3635-2 - 2010/12/07 (火) 17:11:43 - とおりすがい
Taqで増えてきたDNAの配列を読んだらよろしいのでは。

RT-PCRに使うポリメラーゼについて 削除/引用
No.3635-1 - 2010/12/07 (火) 16:53:21 - Camellia
RT-PCRに使うポリメラーゼについて質問させてください。
植物の培養細胞のRNAをcDNAにしたものをテンプレートに、ある遺伝子のRT-PCRを行っています。
ポリメラーゼはTaqを使いました。

予想される長さの位置にバンドが出たので、確認のためサブクローニングをすることになりました。
そこで、ポリメラーゼをEx Taqに変えてPCRを行ったところ、そのバンドは全く出なくなってしまいました。
使っているサーマルサイクラーは同じで、サイクル数を増やしてもバンドは出ません。
なにか考えられる原因と解決策はあるでしょうか。
よろしくお願いします。

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