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(無題) 削除/引用 No.3649-11 - 2010/12/13 (月) 19:41:03 - 困った、くまった仕事人 TSさんありがとうございます。その通りですね。5μmのポアサイズのものがあるのですね。

(無題) 削除/引用 No.3649-10 - 2010/12/10 (金) 21:10:47 - TS 微粒子に標的タンパク質が含まれていないと言うことですし、 どうにかフィルトレーションできる方法を考えればよいと思うのです。 5、0.45μmのポアサイズの順に通していってはどうですか。 これでもだめなら、もっと大きなメッシュでまず除くか、通常の濾紙とかを最初にかませるとか。 単純にフィルター面積を大きくすることもできますね。

(無題) 削除/引用 No.3649-9 - 2010/12/10 (金) 18:50:55 - 困った、くまった仕事人 >モノ自体がアグってるに一票。 これはないと思います。標的蛋白はフィルターをすり抜けますし、標準的な精製方法が適用できます。 ＞ライゼートということは界面活性剤は既に入ってるのでしょうか？ NP-40ありなしで、曇り方がちがうのですが、どちらもフィルターに引っかかります。 どうも、みなさん、フィルターをつまらせる微粒子はあまり問題になっていないようですね。。。

(無題) 削除/引用 No.3649-8 - 2010/12/09 (木) 23:22:08 - yyy 脂質か膜画分がミセルを作ってるのではないでしょうか？ ライゼートということは界面活性剤は既に入ってるのでしょうか？ だとしたら界面活性剤の種類か濃度を変えてみては？

(無題) 削除/引用 No.3649-7 - 2010/12/09 (木) 23:01:03 - ００ モノ自体がアグってるに一票。 塩強度を上げるか下げる、界面活性剤の種類を振る、 ダメになっても惜しくない担体があれば、とりあえず フィルターを掛けないで初期精製を試みてみる、 ぐらいかなあ。

(無題) 削除/引用 No.3649-6 - 2010/12/09 (木) 18:43:10 - 困った、くまった仕事人 みなさん、ありがとうございます。 細胞はバキュロのSf-9、バッファーはTris、３００ｍMKCｌ、0.5％NP-40です。Dounce homogenizerなどで破砕。NP-40ありなしで、曇り方がちがうのですが、どちらもフィルターに引っかかります。脂質による膜なら、超遠心で落ちる？様な気もするのですが。DNAなら、液が粘ちょうになるはずですが、それはありません。蛋白精製ですので、有機溶媒には接触させたくない気もします。

(無題) 削除/引用 No.3649-5 - 2010/12/09 (木) 15:17:55 - ~ 遠心したらどうなるのか分からないのですが、臓器を扱っているのであれば脂質の可能性もありませんかね。 その場合ならば、エーテル抽出で除くことが出来るかもしれません。 http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?mode=view;Code=1154

(無題) 削除/引用 No.3649-4 - 2010/12/09 (木) 15:05:02 - Kanata DNAとか核酸の可能性がありますね。粘性が高いようでしたらそうでしょう。除去するとクリアになりますが、lysis bufferに溶けない蛋白質も多いので、｢曇った」状態にはよくなります。

(無題) 削除/引用 No.3649-3 - 2010/12/09 (木) 14:33:41 - おお もしかしたら高分子(DNA)とかじゃないかと思ったりします。それだと解けていてもそういうことがあり得ますので(くもったりはしませんが、フィルターに通らないとか)。

(無題) 削除/引用 No.3649-2 - 2010/12/09 (木) 14:31:12 - おお 差し支えのない程度で材料やバッファーなどの情報を提供した方が有用な情報が得られると思います。

曇った、困ったライセート 削除/引用 No.3649-1 - 2010/12/09 (木) 09:43:10 - 困った、くまった仕事人 LysateをDounce homogenizerなどで破砕して調製したとき、ひじょうに細かい粒子が遠心や超遠心で除けず、液が曇ったような状態になることがあります。これを精製のために、フィルター（0.45　umなど)にかけようとすると細かい粒子ですぐフィルターが詰まってしまいます。 これを防ぐためにはどうするのが普通なのでしょうか？　フィルターについてくる中敷のプレフィルターのようなものをきょう仲間が使ってみたのですが、効果がないとのことです（どれくらい適切にプレフィルターを敷いたかは不明）。

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