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ありがとうございます 削除/引用 No.365-5 - 2009/04/23 (木) 15:35:05 - はむ ＞Optionalのwashバッファーを除く操作はしていますか？ これは、RPE後に何も試薬を加えずに新しいチューブで遠心する操作のことででしょうか？ 毎回行っています。 昨日注意深く行ったところ、無事収量も260/230値も十分な値のRNAを得ることが出来ました。 なお、収量が極端に少なかった理由がわかりました。ものすごい単純ミスでした。Lysozyme溶液を作る際のTE bufferの容量の記入を間違えていました。 せっかく回答していただいたのにものすごい単純なミスという結果になり申し訳ないです。 回答してくださったお二方、時間を割いていただきありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.365-4 - 2009/04/22 (水) 14:08:45 - 通りすがり 最後のwashのバッファー（RPEでしたっけ？）の持ち込みではないでしょうか。 RNeasyは最後のwashも500ulなので、多サンプル処理時に持ち込みが起こりやすい気がします。 Optionalのwashバッファーを除く操作はしていますか？

回答ありがとうございます 削除/引用 No.365-3 - 2009/04/22 (水) 10:27:02 - はむ 回答ありがとうございました。 >破砕した組織に buffer RLT を添加したあと、冷却してないですよね？ >冷却すると著しく収率が低下することはあります。 冷却はいつもしていません。最初の菌の回収時のみ４℃です。 室温的にもいつもより寒いわけではなくむしろ暖かいくらいでした。 思い当たる節がなく何度もやっている操作なのに、目を疑うくらい低い値が出てしまってびっくりしたのですが、一つ一つ今一度チェックしながらやってみたいと思います。 他にも何か原因として考えられることがありましたら是非教えてください。

(無題) 削除/引用 No.365-2 - 2009/04/22 (水) 02:52:45 - zuum 原因はよくわかりませんが、 beta-ME か グアニジン塩酸塩が混入してるんじゃないでしょうか？ まず、電気泳動して収量のチェックをしてみては？ 破砕した組織に buffer RLT を添加したあと、冷却してないですよね？ 冷却すると著しく収率が低下することはあります。

極端なRNA抽出濃度の低下原因 削除/引用 No.365-1 - 2009/04/21 (火) 16:47:38 - はむ QIAGENのRNeasyを使って細菌よりRNAを抽出し、実験に用いています。 今回もいつも通り、特に変わったことなく実験をしたはずなのですが、RNA濃度が通常の5分の1程度、260/280は2付近で変わりはないものの260/230が見たことないくらい低い値が出てしまいました。 キットの有効期限はOKですし、前回同じ作業をしてから一週間と経っていません。 再試はもちろん行いますが、RNA抽出効率と260/230値が極端に低下してしまった理由として何か考えられる失敗はありますか？ いつもより少しサンプル数が多かったので、きちんとやっているつもりでもどこかでやらかしてしまったんだと思いますが、思い返しても思い当たる点がなくて悩んでいます。

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