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(無題) 削除/引用 No.3688-6 - 2010/12/24 (金) 13:09:15 - iPS初心者 >iPS2年目さん ご意見ありがとうございます。 >フィーダーの密度が高いこと、iPS細胞の状態が悪いこと 確かにフィーダーの密度は気になります。 初めは一応プロトコール（3×10^5cells/well;6well plate）に従い播種していたのですが、iPSの生着があまり良くなかったので密度を1/3から1/2程度にまで落としています。

(無題) 削除/引用 No.3688-5 - 2010/12/24 (金) 12:52:07 - iPS2年目 小生は解離液にコスモバイオのDissociation Solutionを使っておりますが、時々そのような経験があります。 解決にはならないかもしれませんが、継代でしたら気にせず剥がして 軽くピペッティングするか（フィーダーだけ浮いてくるので除く）、 チップでコロニーをピックアップしております。 あくまで印象ですが、 原因は、フィーダーの密度が高いこと、iPS細胞の状態が悪いことが 挙げられる気がします。

(無題) 削除/引用 No.3688-4 - 2010/12/15 (水) 19:11:49 - f KSR/KO mediumでFeederをcultureするとそういう経験があります。 FeederをiPS用のmediumでculture（FeederのみiPSなし）して様子をみたらどうでしょう。 ちなみにその時はトリプシン処理を通常より長くやって、ピペッティングでES細胞をシートからはがしていました。

(無題) 削除/引用 No.3688-3 - 2010/12/15 (水) 15:39:32 - iPS初心者 すみません。書き忘れです。 0.1%gelatinコートしています。 0.1% 1 M CaCl2/PBSを含みます。

(無題) 削除/引用 No.3688-2 - 2010/12/15 (水) 15:11:02 - dec 1. MEFの播種時に0.1%ゼラチンコートはしていますか？ 2. 乖離液の組成をみると、CaCl2が添加されていないようなのですが、単なる書き忘れですか？

iPS細胞の継代時、フィーダー細胞がシート状にはがれてしまう 削除/引用 No.3688-1 - 2010/12/15 (水) 13:28:38 - iPS初心者 ご閲覧ありがとうございます。 私は現在、iPS細胞を培養しているのですが、iPS細胞用解離液を用いてはがそうとするとフィーダー細胞が１枚のシート状になり、iPS細胞をくるむようにはがれてしまいます。iPS細胞を含むので強くピペッティングすることもできず、悩んでいます。 フィーダー細胞の継代時にはこのようなことは起こらないので、解離液に問題があるのでしょうか。 このような事態の解決法をご教授ください。 コロニーカッター等によりiPSをピックする方法は存じていますが、現在のところ、そちらは考えておりません。 フィーダー細胞は購入したPMEF（適当である継代数；passage4〜6）、iPS細胞用解離液は理研のプロトコールに従い作ったTrypsin 0.25%、collagenase type IV 0.1%、KSR 20% in PBS です。また、MEF継代にはTrypsin 0.05%を用いています。

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