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(無題) 削除/引用 No.3757-5 - 2011/01/06 (木) 02:06:59 - カカオ emaさま お返事ありがとうございます。 アポトーシスDNAラダーキットを用いてDNAを分離しています。 99％が死細胞だったのですが、キットを用いてDNAを分離したところ（細胞数は規定の数より若干少なかったです）、ほぼゼロでしたので、 トリパンブルーで青く染まるような死んでしまった細胞からはDNAは分離できないものなのでしょうか？ という質問をさせていただきました。 アポトーシス初期から中期でもトリパンブルーで青く染まるようですが、この段階の細胞ならDNAの分離はできたのだと思います。 薬剤曝露時間を検討していきます。 caspase,TUNELなどによる検出はまだ手がつけれていない状況です。。。

目的が？ 削除/引用 No.3757-4 - 2011/01/05 (水) 14:44:14 - ema DNAを抽出して、、、なにを見たいのかが、分かりにくいです。 アポトーシスであるのを示したいのでしょうか？ネクローシスであるのを示したいのでしょうか？ それとも全く違う話？ アポトーシスのDNAラダーをみたいならもう少し早い時間で回収すればアポトーシスなら見えると思います。私はキットは使わずフェノクロの古典的な方法で出していました。死んでいても強めにエタ沈をかけて回収できました。 ほとんど青く染まる状況はアポトーシス後期になり、中期の反応は過ぎてほとんどネクローシス様の状態になっていて区別できない状態です。ステップとしてアポとネクロ経路なのか、なら、初期から中期のアポ反応（caspase,TUNELなどで検出）があるかないかといかないとしないと区別がつかないと。

(無題) 削除/引用 No.3757-3 - 2011/01/03 (月) 06:31:36 - カカオ おおさま お返事ありがとうございます。 一応、キットを用いてDNAの分離をおこなっております。 トリパンブルー染色で細胞数を数えた際に、99％が青く染まっており、細胞の内容物が飛散しているような様子が観察できたので、DNAも漏れてしまい、まったく分離できなかったのかなと考えていました。 確かに、DNAの分解がかなり進んでいたのだと思われます。 その場合、収量はさがってしまうのですね。 もう少しはやいステージでのDNAの分離を試みてみます。

(無題) 削除/引用 No.3757-2 - 2011/01/03 (月) 05:50:49 - おお 取れると思いますが、分解が進んでいる可能性がありますので、収量は低いかもしれません。高分子のDNAは得られないかもしれません。キットをお使いであれば、インタクトに近い高分子DNAが効率よく回収できるようになっている可能性もありますね。 精製方法ともう少し早い時期に回収できるかという二点を考慮してみてはいかがでしょうか。

培養細胞からのDNAの分離 削除/引用 No.3757-1 - 2010/12/30 (木) 19:38:24 - カカオ 培養細胞に、細胞死（アポトーシスかネクローシスかはまだわかりません）を誘導する薬剤を添加し、数時間後に細胞のDNAを分離しています。 今回、薬剤の曝露時間を長くした結果、ほとんどが死細胞（トリパンブルーで青く染まる）になり、とりあえず死細胞を数えてDNAを分離したところまったく分離できませんでした。死細胞の数は、コントロールの生細胞からDNAを分離した際とほぼ同じ細胞数です。 トリパンブルーで青く染まるような死んでしまった細胞からはDNAは分離できないものなのでしょうか？

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