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(無題) 削除/引用 No.3880-5 - 2011/02/06 (日) 11:32:23 - kkk PD10で全てのタンパク質が無いとはどういうことですか？ 目的のタンパク質が2000以上だったら95%以上は回収 されると思います。それでは不十分なのでしょうか。 もしPD10使用時に50%グリセロールをお使いでしたら それが問題かもしれませんので、まずグリセロールを 除いたバッファーでバッファー交換を行い、その後 グリセロールを加えてはいかがでしょうか。

buffer置換 削除/引用 No.3880-4 - 2011/02/06 (日) 10:39:54 - test >25 mM Tris-HCl pH 8.0 >50 mM NaCl >0.5 mM MgCl2 >50% glycerol >への置換を考えています。 確認したいのですが、 溶出緩衝液は 25 mM Tris-HCl 50 mM NaCl 0.5 mM MgCl2 50% glycerol -400 mM imidazol pH 8.0 なのですよね。 思いつきですが、 imidazolの代わりに何か塩を加えてみるとかはどうでしょうか？

PD-10 削除/引用 No.3880-3 - 2011/01/26 (水) 15:07:28 - あらきち いつも大変お世話になっております。 現在、タンパク精製を行っているのですが、 方法は、昆虫細胞に、Hs-tagged proteinを発現させ、その後精製しています。 イミダゾールの溶出までで、目的のタンパク質(純度;95%,濃度;200 ng/uL)が得られました。 ここからが問題なのですが、その後の buffer置換がうまくいきません。（イミダゾールが反応系を邪魔する為に除去は必須） 透析を行うと、濃度が1/10になり、また脱塩カラム（PD-10）だとすべてのタンパクがありません。 これは、何かタンパク質の性質によるものでしょうか？ ちなみに、25 mM Tris-HCl pH 8.0, 50 mM NaCl, 0.5 mM MgCl2 and 50% glycerol への置換を考えています。 何かもし知っている方がいらっしゃいましたら、どんなことでも良いのでよろしくお願い致します。

PD-10 削除/引用 No.3880-2 - 2011/01/26 (水) 14:56:49 - あらきち

PD-10 削除/引用 No.3880-1 - 2011/01/26 (水) 14:55:22 - あらきち 25 mM Tris-HCl pH 8.0, 50 mM NaCl, 0.5 mM MgCl2 and 50% glycerol

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