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(無題) 削除/引用 No.3946-4 - 2011/02/07 (月) 12:48:36 - すずめ ずっと以前に似たような試験をしましたが・・・ この実験でもっとも重要なネガコンは、「目的低分子物質がついていない Dynabeads」へのファージ結合性だと思います。 Dynabeadsからクエン酸で分離したファージを、再度 1.目的低分子物質がついているDynabeads 2.目的低分子物質がついていないDynabeads に吸着させた場合の結果が重要です。すでに試されていますか？ ンンンさんやlibraryさんのご指摘どおり、Dynabeadsに吸着するクローン なら両者に差がでないはずです。

(無題) 削除/引用 No.3946-3 - 2011/02/07 (月) 12:14:27 - library ンンノさんの意見に賛成で、追加の検討課題が思いつきます。 抗原は低分子ということですが、Dynabeadsを用いた固相化法とELISAでの固相化法は同じでしょうか？リンカーを使用している場合は、リンカーの構造を含めて認識している抗体も取れてきます。 peptideなどの低分子を吸着で固相化すると、固相化表面やブロッキング剤に結合するファージが結構とれてきます。 この辺を解決できるかが成功の鍵となるでしょう。

(無題) 削除/引用 No.3946-2 - 2011/02/07 (月) 00:27:33 - ンンノ >スクリーニングで非特異的なものを回収してきて、 　発現させているのでしょうか。 その通りでしょうね。 非特異的なものを如何にして抑えるかが成功の鍵でしょう。

ファージディスプレイ法でのELISA 削除/引用 No.3946-1 - 2011/02/06 (日) 19:07:27 - ファージ 　ファージディスプレイ法で低分子物質に対するモノクローナル抗体を 　作製する実験を行っています。 　スクリーニングは、目的低分子を定着させたDynabeadsによっておこない 　回収したファージをTG-1に感染させ、コロニーを発現させております。 　Dynabeadsからクエン酸で分離したファージをTG-1に感染させ、 　プレートにまいてo/nすると、翌日きちんとコロニーは発現しています。 　 　ということは、目的に対するファージを回収できているのでは 　ないかと自分は考えていました。 　しかし、このファージを用いてELISAをおこなうと 　まったく数値として反応がえられません。 　特異性があるものを得られているはずなのに、ELISAでは反応しない 　ということは、スクリーニングで非特異的なものを回収してきて、 　発現させているのでしょうか。 　ファージディスプレイ法におけるELISAでなにかご存知でしたら 　ぜひ教えていただきたいです。 　よろしくお願いします。

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