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変異マウスをホモだけで継代してもOK? トピック削除
No.69-TOPIC - 2009/02/22 (日) 12:02:49 - DSC
ある遺伝子に変異を導入したノックインマウスを作りました。ESのバックグラウンドはCBA x B6です。現在、バッククロス8回を終えたところです。だいたいバッククロス8回でほぼコンジェニックと言ってよいと聞いていたので(この辺り誤りでしたらすみません)、次のようなことを考えています。

(1)今後、変異をホモでもつマウス(♂・♀)を選別してそれらだけを残し、それらを交配してホモ変異マウスのラインを継代していく。

(2)ヘテロが必要になったときだけB6を購入し交配してヘテロを得る。

一応各世代でgenotypingしようとは思いますが、これまではB6との交配後にWTホモと変異ヘテロの選別に神経質になっていたのから解放されると思っています。また、常に若いB6♀を準備する必要がなくなるのが楽でよいなーと思っています。

バッククロスは回数が多いほどよいというのはわかりますが、飼育スペースやB6の購入費用や手間の問題から、上記の方法に移っていっても問題ないでしょうか? 考えられる弊害があればお教えください。ちなみに、変異ホモでも寿命や生殖能力に目立った違いはなさそうです。
 
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(無題) 削除/引用
No.69-3 - 2009/02/22 (日) 18:09:56 - DSC
ねずみ屋さま

さっそくのご返事、ありがとうございました。
不勉強で失礼しました。JaxonのHPを確認させていただきました。コンジェニックの定義を知らなかったので、勉強になりました(「レシピエントゲノムの割合が99.9%以上」という理解でよいのですよね?)。その他の命名法などについても、読んでみようと思います。

N10を過ぎたら、変異マウスのみでの系統維持を検討していこうと思います。初めのうちはB6との交配も継続しつつ、ホモどうしの交配ではご指摘のとおり育児の様子に気をつけておこうと思います。

ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.69-2 - 2009/02/22 (日) 12:53:13 - ねずみ屋
実験動物業者です。
スピードコンジェニック法を使ってないのでしたら、コンジェニックが完了するのは10世代以上となります。

http://jaxmice.jax.org/nomenclature.html

コンジェニック完了後、雌雄いずれもホモの繁殖能力に問題なければホモ同士の交配で系統維持を行っても問題ないと思います。
ヘテロも必要になるのでしたら、ホモxヘテロの交配で系統維持をするのもありかと思います。
ただ、一見すると生殖能力に問題無さそうに見えても、中には普通に交配もして妊娠もして分娩もするけれど保育をしないヌードマウスみたいな系統もいますので、ホモの雌雄いずれも繁殖能力に異常がないことをちゃんと確認しておくことをお勧めします。

変異マウスをホモだけで継代してもOK? 削除/引用
No.69-1 - 2009/02/22 (日) 12:02:49 - DSC
ある遺伝子に変異を導入したノックインマウスを作りました。ESのバックグラウンドはCBA x B6です。現在、バッククロス8回を終えたところです。だいたいバッククロス8回でほぼコンジェニックと言ってよいと聞いていたので(この辺り誤りでしたらすみません)、次のようなことを考えています。

(1)今後、変異をホモでもつマウス(♂・♀)を選別してそれらだけを残し、それらを交配してホモ変異マウスのラインを継代していく。

(2)ヘテロが必要になったときだけB6を購入し交配してヘテロを得る。

一応各世代でgenotypingしようとは思いますが、これまではB6との交配後にWTホモと変異ヘテロの選別に神経質になっていたのから解放されると思っています。また、常に若いB6♀を準備する必要がなくなるのが楽でよいなーと思っています。

バッククロスは回数が多いほどよいというのはわかりますが、飼育スペースやB6の購入費用や手間の問題から、上記の方法に移っていっても問題ないでしょうか? 考えられる弊害があればお教えください。ちなみに、変異ホモでも寿命や生殖能力に目立った違いはなさそうです。

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