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(無題) 削除/引用 No.90-2 - 2009/02/26 (木) 08:39:40 - A >>�Aｲﾝｷｭﾍﾞｰｼｮﾝ温度を上げるとｺｰﾃｨﾝｸﾞ効率が上がったのですが、皆さんが4℃でやられているのはなぜでしょうか。 うちでは37℃ 2h or 4℃　O/Nです。 理由はあまり37℃に蛋白を放置するのは好ましくないからではないでしょうか。 �B他に考えられる可能性はありますか？単に抗体が悪いのでしょうか。 うちで何度かＥＬＩＳＡ系を作った際は、20ug/mL程度のでほぼ飽和してくる傾向にあります。 シグナルが十分に得られないのであれば、増感の方向でご検討されては？ （Biotin化抗体とAvidin-PODの使用など）

ﾌﾟﾚｰﾄへのｺｰﾃｨﾝｸﾞ条件(ELISA用） 削除/引用 No.90-1 - 2009/02/25 (水) 11:54:26 - rabbit ELISAﾌﾟﾚｰﾄへの抗体ｺｰﾃｨﾝｸﾞがうまくいきません。 ｺｰﾃｨﾝｸﾞ剤は0.05Mcarbonate/bicarbonateを用います。 抗体濃度は40ug/mL、ｲﾝｷｭﾍﾞｰｼｮﾝ37℃ overnightとしてようやく多少はｵｰﾃｨﾝｸﾞされました。 （ｺｰﾃｨﾝｸﾞはMicro-BCA法で確認しております。） 抗体濃度、ｲﾝｷｭﾍﾞｰｼｮﾝ時間を上げていくと多少改善されそうですが、 一般的に抗体濃度10ug/mL以下、ｲﾝｷｭﾍﾞｰｼｮﾝ4℃でやられている方が多いようです。 そこでいくつか質問があります。 �@ｺｰﾃｨﾝｸﾞﾊﾞｯﾌｧｰの濃度、pHを変化させると改善されるでしょうか？ �Aｲﾝｷｭﾍﾞｰｼｮﾝ温度を上げるとｺｰﾃｨﾝｸﾞ効率が上がったのですが、皆さんが4℃でやられているのはなぜでしょうか。 �B他に考えられる可能性はありますか？単に抗体が悪いのでしょうか。 なお、抗体はThermo社製のもの、ﾌﾟﾚｰﾄはnunc社製の高ﾀﾝﾊﾟｸ結合ﾀｲﾌﾟを使っております。 宜しく御願い致します。

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