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SolutionI中のグルコース トピック削除
No.4183-TOPIC - 2007/05/09 (水) 23:12:47 - Taka
プラスミド精製に用いるSolution Iにはなぜグルコースが入っているんでしょうか?なくてもいいような気がするのですが。。
 
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(無題) 削除/引用
No.4183-7 - 2007/05/10 (木) 21:02:57 - T
キアゲンキットの Buffer P1 は 50mM Tris-Cl, pH8.0, 10mM EDTA ですね。
「最初に報告した人が使っていたから」というのが一番実態に近いような気もします。

グルコース抜きで 削除/引用
No.4183-6 - 2007/05/10 (木) 20:20:33 - Taka
グルコース抜きでやってみましたが、全く支障ありませんでした。
EDTA濃度が高いのはヌクレアーゼ分解を防ぐためだというのは推測できますが、すぐにSDS変性してしまうのであんまり関係ないような気もします。
TEなんかでも大丈夫なのでは、と考えてしまいますがどうなんでしょうかね。

(無題) 削除/引用
No.4183-5 - 2007/05/10 (木) 16:58:08 - 奴隷
pHが高い領域では干渉能があります。浸透圧保護剤だという説明をする方がありますが、たかだか50mMだし、グルコースである理由にもなっていないのではないでしょうか。

手許にある資料としては、Current Protocols in Molecular Biologyの1.7.2に次のようにあります。

Glucose serves as a buffer in step 6 (Solution IIを入れるstep)when the pH of the solution is greatly increased by addition of NaOH. Glucose provides buffering in the range of pH 12 and, by preventing the pH from rising too drastically in step 6, increases the efficiency of precipitation in step 7 (when the pH is lowered by addition of potassium acetate).

(無題) 削除/引用
No.4183-4 - 2007/05/10 (木) 14:44:56 - E.coli
浸透圧を高めてE.coliがバーストしないようにするため
と聞きました。

え? 削除/引用
No.4183-3 - 2007/05/10 (木) 13:41:43 - TS
勉強不足で、すみません。
グルコースに緩衝能があるんですか?

(無題) 削除/引用
No.4183-2 - 2007/05/10 (木) 11:58:22 - 奴隷
Solution IIを入れたときにpHが極端に高くならないようにバッファーとして入っています。

SolutionI中のグルコース 削除/引用
No.4183-1 - 2007/05/09 (水) 23:12:47 - Taka
プラスミド精製に用いるSolution Iにはなぜグルコースが入っているんでしょうか?なくてもいいような気がするのですが。。

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