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(無題) 削除/引用 No.2163-2 - 2006/03/15 (水) 15:49:13 - 名無し このアフィニティー精製の原理を調べると分かると思いますが、HistidineとNiの間の相互作用は遊離の2価金属イオンやキレート作用を持つ成分により著しく妨害されます。このような物が試料や洗浄液に一定濃度を超えて存在していると吸着しません。どのようなものが該当するかは、説明書に記載されているか、販売元に問い合わせればデータをくれると思うので、一度見直してください。あと還元剤は入れた方がいいと思います。

変性条件下でのNiカラム精製 削除/引用 No.2163-1 - 2006/03/15 (水) 12:07:12 - 学部四年のT 　80kDaくらいの目的タンパク質にNusA-Tag,S-Tag,そしてHis-Tagを二個つけ、大腸菌で発現させています。全体でおよそ150kDaくらいになります。 　封入体を形成するため、8M尿素入りのリン酸バッファー(pH7.8)で変性させ、これをNiカラムにより、変性条件下で精製を行っています。しかし、目的タンパク質がカラムに吸着しません。変性の段階でDTTなどの還元剤を加えていないことに原因があるのでしょうか？ 　どなたか教えていただけないでしょうか？お願いします。

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