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(無題) 削除/引用 No.679-7 - 2011/07/17 (日) 20:02:04 - 麹町のサルーン お返事が遅くなり申し訳ございません。 測定の一例をお示しいたします。 標準BSAは手作りで系列化しました。検量線も毎回作製しています。 BSA.濃度　　　吸光度 0.33mg/ml 　　0.293 0.05 0.307 0.1 0.354 0.3 0.439 0.5 0.513 0.7 0.536 1 0.553 測定タンパクの測定結果は下記の通りです。 1/10希釈　　　　0.309 1/2希釈　　　　 0.349 これからタンパク濃度を推定すると、1/10の時は1.05mg/mlですが、1/2だと0.48mg/mlとなってしまうのです。 皆様のご指摘にあるような界面活性剤は入っておりません。タンパクは難溶性なのですが、遠心し上清を使用しています。

(無題) 削除/引用 No.679-6 - 2011/07/16 (土) 20:52:04 - BBB 蛋白質試料溶液が濃くて蛋白質がちゃんと溶けてないとばらつきが目立つことあります。ピペッティングで微細な固まりとかが入ってしまったものはえらく高い値が出たりとかするので。 試料液を遠心するなどして不溶物を除いたものをassayに使うと改善されする可能性があります。 ブラッドフォールド法は簡単で自作も容易ですが、ある種の界面活性剤などの影響を受ける場合がある事や、試薬が古くなると直線性のある範囲が使用当初よりもかなり狭まってくるなどの欠点もあります。

(無題) 削除/引用 No.679-5 - 2011/07/16 (土) 07:43:41 - Y 検量線は毎回とってますか？ スタンダードは市販のものを使ってますか？ 希釈系列の結果は測定範囲内に入ってますか？

(無題) 削除/引用 No.679-4 - 2011/07/16 (土) 00:22:42 - Kanata Bradford法を使って蛋白質の定量をしていますが、そんなにばらついたりはしません。TSさんがおっしゃるように界面活性剤が含まれている場合は影響がかなりあります。（他の試薬を使う） 系列で希釈してサンプルの定量をすることはありますが、具体的に説明していただけると何が違うのかわかるかと思います。

(無題) 削除/引用 No.679-3 - 2011/07/16 (土) 00:03:27 - TS ブラッドフォードは、界面活性剤などに非常に弱いですが、希釈系列を作るときに、そのあたりを気にしていますか。

(無題) 削除/引用 No.679-2 - 2011/07/15 (金) 22:51:33 - qq >タンパクの節約のため、系列で希釈したものを測定すると計算結果に2倍くらい差が出てしまいます。 とは、どういう状況なのでしょうか？ 系列で希釈したものを測定して、薄すぎたり、濃すぎたりしない適切な濃度域の濃度から、タンパク量を推定するのではないでしょうか？

タンパク定量　ブラッドフォードの精度 削除/引用 No.679-1 - 2011/07/15 (金) 21:54:48 - 麹町のサルーン いつも参考にさせていただいております。 私はタンパク質の解析をはじめたものですが、タンパクの定量で困っております。 Biorad社のプレートリーダーと試薬を使いブラッドフォード法を行なっているのですが、あまり信頼できる結果が得られません。タンパクの節約のため、系列で希釈したものを測定すると計算結果に2倍くらい差が出てしまいます。 このような状況になってしまう原因や改善方法をご存知の方がいらっしゃいましたら、ご教授ください。

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