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マウス末梢血より全白血球を採取する方法 トピック削除
No.1379-TOPIC - 2013/01/25 (金) 05:15:18 - マウス
マウス末梢血より全白血球(多核型白血球+単核球)を分取したいのですが、比重遠心法により一度に分取できる方法はあるでしょうか?
ラボにPercollがありましたので、簡便・最適なプロトコールをお教え頂けると幸いです。
 
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No.1379-7 - 2013/01/26 (土) 12:45:14 - MP
ACKを10分2回、その後PBS2%FCSでwash2回でほぼペレットは白くなります。

(無題) 削除/引用
No.1379-6 - 2013/01/26 (土) 09:51:46 - あ
percollはACKより難しいんですけど。

(無題) 削除/引用
No.1379-5 - 2013/01/26 (土) 04:37:26 - マウス
ammonium chlorideで溶血してみたのですが、
5分放置では遠心後もペレットが赤くて気持ち悪いんですよね・・
時間を長くすべきでしょうか

(無題) 削除/引用
No.1379-4 - 2013/01/25 (金) 10:07:15 - よっしー
顆粒球の比重はリンパ球と赤血球との間くらいなので,
75%と40%の界面で取れると思います.
しかし,100%パーコールの作成方法,遠心機の温度とGによってこれらの条件は変化するので,赤血球がぎりぎり底に落ちるパーコール濃度を,ご自身で捜された方がいいと思います.

目的にもよりますが.溶血が一番楽だとは思います・・・

(無題) 削除/引用
No.1379-3 - 2013/01/25 (金) 09:43:37 - マウス
よっしーさん

お返事有り難うございます。
単核球は40%Percollと70%Percollの中間層に20分2000回転で分取できると思うのですが、多核球も分取するとなるとPercollの濃度はどのようにしたらよいでしょうか?
もしご存じなら教えて頂けると幸いです。

(無題) 削除/引用
No.1379-2 - 2013/01/25 (金) 09:23:10 - よっしー
濃いめのパーコールで赤血球を落とし,白血球を浮かす(2層で界面に集めた方がいいかな?)

ACTや薄めの食塩水で溶血させる(一番安価で簡単)

セルソーターを使ってサイズで分取.

マウス末梢血より全白血球を採取する方法 削除/引用
No.1379-1 - 2013/01/25 (金) 05:15:18 - マウス
マウス末梢血より全白血球(多核型白血球+単核球)を分取したいのですが、比重遠心法により一度に分取できる方法はあるでしょうか?
ラボにPercollがありましたので、簡便・最適なプロトコールをお教え頂けると幸いです。

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