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(無題) 削除/引用 No.1997-11 - 2013/05/15 (水) 10:23:30 - R >ヒートショックも植菌前の培養も必要な商品が販売され続けているからには、何か不具合があるのではないかと思うのです。 ヒートショックは別に手間に思っていないし、 セレクションがAmpだったらadaptationもいらないし、、、 で、今の系から切り替えるのが面倒、と私は思っています。 >使用予定のpUC系のプラスミドがすでに約6kbpなので、約１kbpを導入しようとすると、約7kbpになります コンピテンシーを気にする必要はないと思います。 あまり頻繁にコンストラクト作らなくなったのですが、 4-5年前に購入して-80℃に残ってたセル (TOYOBO) でも同様のコンストラクト作製には問題ありませんでした。

(無題) 削除/引用 No.1997-10 - 2013/05/15 (水) 03:54:58 - おお >[Re:1] ponyさんは書きました : > 実際に使用されたから、使用感はいかがだったでしょうか？ヒートショックも植菌前の培養も必要な商品が販売され続けているからには、何か不具合があるのではないかと思うのです。 使用感は使用していませんのでかけませんが、10の8じょう程度のコンピテンシーがあるようなので、大抵のものは大丈夫ではないでしょうか。 不具合かどうかはわかりませんが、非常にいい状態ではケミカルコンピテントでも10の9じょう以上だせますので(10の9じょうぐらいのものをうっている会社もあります)、そのへんが違いではないでしょうか。 難しい(場合によっては何が要因で難しいか分からない場合もあるかと思いますが)ものや、3ピースとか、ライブラリーなどが念頭にある場合は、お示しのものよりは通常のものが好まれるかもしれません。 10の7あればなんとかラボの大抵のコンストラクションは何とかなるんだと思います。

(無題) 削除/引用 No.1997-9 - 2013/05/14 (火) 23:22:47 - ぽ 便乗質問はしない方が良いですね。話題が発散してしまい、トピ主さんにとっては必要な情報を得られなくなるので。

(無題) 削除/引用 No.1997-8 - 2013/05/14 (火) 21:48:05 - pony すみません、使用予定のpUC系のプラスミドがすでに約6kbpなので、約１kbpを導入しようとすると、約7kbpになります。 HIT competent cellにはいろいろなグレードがあるようです。どれがおすすめでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1997-7 - 2013/05/14 (火) 18:37:30 - Q 扱っている遺伝子が変わったからじゃないのですか？

(無題) 削除/引用 No.1997-5 - 2013/05/14 (火) 11:01:55 - TS あ、情報かぶったね(^_^

(無題) 削除/引用 No.1997-4 - 2013/05/14 (火) 11:00:26 - TS 私感では、特には悪くなかったです。 いろいろと、マニュアルに書いてある程度でした。 気になったのは、リカバリーメディアムというのがついているんだけど 最初は透明だけど、凍結融解を繰り返すと濁るようになって、 なんだろうなぁと思ったくらいです。効率に影響はなさそうでしたが。 ただ今は、以下のコンピの使用感がけっこう良く、価格も安いのでこれを使っています。 http://www.scitrove.co.jp/rbc/HIT.html#DH5a

(無題) 削除/引用 No.1997-3 - 2013/05/14 (火) 11:00:26 - AA 1kb程度のインサートであれば特に高効率でなくても生える気がしますが、、、 以前JETコンピを使っていましたが特に気にせず使えていました。 その後価格の都合から下記のHIT competent cellに切り替えましたが、 http://www.scitrove.co.jp/rbc/HIT.html どちらにせよ、non-heat shockタイプのケミカルコンピでも簡単なクローニングであれば苦労しません。 保存期間と効率については、いちいちチェックしたことはないですし、結構使いきってしまうのでわかりませんが、 過去に一度、冷凍庫から発掘したHIT comptetentのJM109を使って1.2kbほどのインサートを増やしたことがありますが問題なく生えました。 もちろん、10の9乗を超えるような高効率というのはなかなか出ないです。

(無題) 削除/引用 No.1997-2 - 2013/05/14 (火) 10:55:32 - λ pUC系に1kb程度のフラグメントを入れるだけなら コンピテントを自作してみては？ 最も基本的な塩化カルシウム法で十分いけると思います。 必要な試薬は塩化カルシウムとグリセロールくらいです。 プロトコール例 http://www.biology.kyushu-u.ac.jp/~hassei/sagata/lab_only/protocols/cacl2.html ちなみに、JETシリーズは普通に使えます。 ３年前のありますが、まだワークしますし。 1kb程度のクローニングでしたら、JETコンピ10μLにライゲーション溶液 を5μLくらい投入しても十分な量のポジティブクローンが得られるかと。 余ったコンピは３回くらい凍結融解した事がありますが、問題は感じません。

Jet Competent Cell の使用感はいかがでしょうか？ 削除/引用 No.1997-1 - 2013/05/13 (月) 20:08:09 - pony お世話になります。皆様の御経験をうかがいたくよろしく御願いします。 当方ではRTPCRで増幅した約１kbのインサートをライゲーションしたpUC18系のプラスミドを、何らかのコンピテントセルを用いて調整しようと計画しています。 購入商品を検討している中で、ヒートショックも植菌前の培養も不要という宣伝文句の次の商品を見つけました。 Jet Competent Cell (DH5α)　 www.biodynamics.co.jp/prd_ds210.htm 実際に使用されたから、使用感はいかがだったでしょうか？ヒートショックも植菌前の培養も必要な商品が販売され続けているからには、何か不具合があるのではないかと思うのです。 ”-80℃ で12ヶ月ほとんど形質転換効率の低下なく安定”という宣伝文句も、実際はどうなのかが気になっています。 以上、よろしく御願いします。

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