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(無題) 削除/引用 No.7133-6 - 2018/08/10 (金) 12:49:19 - asan 蛍光の場合は、励起波長の強さとか試料に当たるまでの減衰などの影響もあるので、ずれることは結構あるのではないかと思います。一般的に細胞のドラッグスクリーニングなんかでも、本来線型性の高い蛍光よりもルシフェラーゼ等の発光を積極的につかうことが多かったのはおそらくそういう励起波長のタイミングによって同じ機械で同じ条件ではかってもブレる影響が結構あるから、なかなかプレートリーダーで人が操作するような実験系では向いてないからなのではないかと思います。 lucで時間を指定する一番の理由は化学発光はATPによる酵素基質反応ですから、当然減衰していきますので一定の安定な範囲でのフォトンカウントの総和を取る必要があるからではないでしょうかね。 もちろん蛍光も試料によっては励起し続けるとへたってきたりはしますけど。 あなたの理論で機械間のずれ等なしに絶対値として蛍光が見られるならば、FACSなどのキャリブレーションも精密なコンディションでは不要という話になりますが、実際のところそういう個体差のずれなんかも含めてキャリブレーションして使用するものなのではないかと思います。

(無題) 削除/引用 No.7133-5 - 2018/08/10 (金) 05:26:52 - おお ありがとうございました。Outputが相対的で比較はできないというのは検出メカニズムから明らかなんですが、違うタイプの機種間でひとけた以上のオーダーが違うような気がしてます。個人的には驚かないのですが、ほら違ってもおかしくないよと示せるなにかないかなぁと、、、

(無題) 削除/引用 No.7133-4 - 2018/08/09 (木) 19:49:23 - SYBR master >[Re:1] おおさんは書きました : > でいまちょっと困っているのは文献の数値と一桁オーダーが違うと突っ込まれたとき、その数値は相対的なもので数値を直接比較できないと言うことだと思うのですが、それに関して具体的なものが提示できません。 日立ハイテクサイエンスのHPの、「1蛍光って何」の最後に 「しかし、蛍光法では、蛍光強度の値は相対的強度です。単位もないのです。例えば、検出器の固体差などによって、同じメーカーの同じ型の装置で測定しても、結果の数値が違ってしまうことがしばしばあります。同じ試料を測定しても、その発光強度は、100であったり50であったりまちまちです（そのスペクトルの形は変わりませんが）。他のメーカーの装置であれば言わずもがなです。」 とあります。蛍光測定の単位表記は、relative fluorescence values (RFU),またはarbitrary values (AU)をつかうので、相対値であることは自ずとだと思いますが。 英語の表記だと、 www.researchgate.net/post/How_do_I_represent_Fluorescence_in_arbitrary_units のLI-COR Biosciencesの返信でしょうか。

(無題) 削除/引用 No.7133-3 - 2018/08/09 (木) 06:52:27 - おお Fluorescence Spectrophotometerというよりfluorometerといったほうが良かったかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.7133-2 - 2018/08/09 (木) 06:33:24 - おお >LuminescenceをはかれるPlate readerでは（少なくとも私がつかっているものは）、測定時間を設定することはできません。 実際の測定時間も仕様を見たけど探しきれてないんですが１秒より短いと思います。３０回測定させても数秒で終わりますから。

蛍光強度測定機器 削除/引用 No.7133-1 - 2018/08/09 (木) 06:29:36 - おお 各種蛍光強度測定機器から出てくる数値が同じサンプルでどれくらい違うのかということを聞きたいと思ってます。 蛍光強度測定機器はFluorescence SpectrophotometerやPlate readerなどいろいろなタイプがありますが、データーとして数字が出てくるのはRLUあるいは相対的蛍光強度だと思います。 プレイとリーダーの場合、非常に短い時間光を測定して、複数のWellのスキャンが早くなるようにしてあり必要であれば測定を複数繰り返すことにより誤差を平均化して正確な数字が出るように対応しています（私のものは精度の調整のパラメーターとして１から３０回測定が指定でき、正確にするほどスキャンスピードが落ちます）。 Fluorescence Spectrophotometerはそこまで一回の測定の時間を短くせずに測れると思うので、（測定時間が自由に設定できるのかはわかりませんが）リピートせずに正確な数字が出ると思いますが、そうするとディテクターの仕様、感度がプレートリーダーと全く一緒だとすると数値は大きくなると思います。実際蛍光でなくって発光でLuciferaseでつかわれる専用のLuminometerは５秒間測定とか自分で決めれますが、LuminescenceをはかれるPlate readerでは（少なくとも私がつかっているものは）、測定時間を設定することはできません。 でいまちょっと困っているのは文献の数値と一桁オーダーが違うと突っ込まれたとき、その数値は相対的なもので数値を直接比較できないと言うことだと思うのですが、それに関して具体的なものが提示できません。 皆さんは測定時間がいじれないPlate readerとFluorescence Spectrophotometer（もしくは測定時間が設定できるLuminometer）で同じようなサンプルで大きな数値の違いとか経験したとか、どれくらい数値として差があるのか示されているものをご存知でしょうか？

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