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(無題) 削除/引用 No.8248-4 - 2019/09/18 (水) 00:53:00 - おお >どうやら真核生物分泌タンパク質はシグナルを除いた方が大腸菌においての発現率及び可溶化率が改善されるようです。 おそらく機能しないので、そういう疎水性の部分があぐったり、大腸菌に悪さしたりするんでしょうね。periplasmに移行すれば物によるでしょうけど一般に可溶性は高いと言われているようですし。またperiplasmに移行したとしても菌体内で発現させるよりは収量が落ちるという話もあるようです。

(無題) 削除/引用 No.8248-3 - 2019/09/14 (土) 14:47:11 - 修士１回 分泌シグナルペプチドについては自己解決いたしました。どうやら真核生物分泌タンパク質はシグナルを除いた方が大腸菌においての発現率及び可溶化率が改善されるようです。 pelB leaderについてはやはりSS結合の改善のためつけたほうがよいのですね。 もしつけない場合は自分でリフォルディングすることになりそうです。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.8248-2 - 2019/09/14 (土) 03:38:10 - おお ヒトなどの動物のサイトカインなど分泌されるものは、シグナル配列を削って大腸菌で発現させる事が多いです。 periplasmへの分泌のためのLeader配列はつけることもあるし、つけないこともあるような気がします。つけたほうが分子内のS-S結合には有利でしょう。菌体内であればS-S結合を形成させる作業が必要になるかもしれません。参考までに。 https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0054933 https://pdfs.semanticscholar.org/8d71/8628b09ceb0d4ee1b173a344a9b77e0c5ef1.pdf

pET22bベクターに分泌型タンパク質の配列を組み込みたい 削除/引用 No.8248-1 - 2019/09/13 (金) 17:52:52 - 修士１回 ごく初歩的な質問かもしれませんがご容赦ください 現在、植物由来のタンパク質の大腸菌においての発現系構築を試みようとしています。 このたんぱく質はN末端側に小胞体シグナルペプチドを保持しているため、細胞外ではこのペプチドは失われると考えています。 この場合、 1.pelB leaderを除いたpET22bにはシグナル配列を除いた全長配列を組み込むべきか 2.pelB leaderの後に配列を組み込む場合、シグナル配列を除くべきか この二つについてお教えください。 研究室の教授によれば、シグナル配列を入れたまま、ORFをベクターに組み込むべきだと言っているのですが、大腸菌内において植物のシグナルペプチドが本当にのぞかれるのか、またpelB leaderとの兼ね合いはどうなるのかが、調べてもよくわからないのです。 よろしくお願いいたします。

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