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接着力の強い剥離防止コートスライド(凍結切片用) トピック削除
No.9023-TOPIC - 2020/07/16 (木) 11:30:33 - 粘り腰

凍結切片の蛍光免疫染色に使用するスライドグラスについて教えて下さい。

これまで使用していたThermo ScientificのSuperFrost Ultra Plusが入手できなくなり、代替品にて一部のサンプルで剥離が生じて困っております。

条件の概要は下記のとおりです。

@未固定マウス腫瘍をOCTに包埋、凍結
A薄切 (7〜10μm厚、クリオスタットの温度は種々検討中)
B風乾 1h
Cアセトンまたはアセトン+メタノール固定 数分
D風乾 30min
Eブロッキング→染色→封入

染色中にどこかで剥離が生じ、早いものではブロッキング液載せた段階で剥がれます…

もちろんCで2%ホルマリン数分固定にすれば剥がれないのですが、染色性が落ちそうな抗体がいくつかあるのでできれば避けたいところです。


未固定試料をアセトン等で固定するケースで接着力の高い剥離防止コートスライドをご存知でしたら教えて下さい。

よろしくお願いいたします。
 
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No.9023-7 - 2020/07/24 (金) 22:07:39 - cvghui
松浪の剥離防止コートスライドグラス を使用しています。未固定凍結切片・アセトン固定とかパラフィン切片でIIARなどで加熱処理とかすることがありますが一度も剥がれたことありません。

最適な材料を選ぶ際には実験をしてる本人の裁量が優先されるべきで、ボスの意向とか関係ないと思います。

(無題) 削除/引用
No.9023-6 - 2020/07/21 (火) 22:25:10 - ema
同じスライドでもロットによって染まりや剥離率が異なることがあり
松波 剥離防止コートスライドグラス クレストSCRE は安定的でした。

(無題) 削除/引用
No.9023-5 - 2020/07/21 (火) 10:21:41 - 粘り腰
ありがとうございます。やっぱり松浪1択ですかね。

固定や抗体含めて臨機応変にやっていきたいのが本音ですが、過去から積み上げてきた知見を大切にしたい、過去データとの比較をしたい等のボスのご意向がありますので、片っ端から試すしかないですね…

(無題) 削除/引用
No.9023-4 - 2020/07/20 (月) 12:52:04 - TS
確かに有機溶媒の固定は剥離に悩まされることがありますね。
プロトコールが決まっているようですので、適切なスライドグラスを松浪硝子とかに問い合わせてみたらいいんじゃないですか。
剥離させないTipsとかも教えてくれるかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.9023-3 - 2020/07/17 (金) 22:03:55 - さんこう
アセトンではやったことがないので、参考程度で・・・




とりあえず松波の

SCRE-01

SPRO-01

あたりから試してみてはいかがでしょうか。

どちらも100枚で定価3000円+税 です

(無題) 削除/引用
No.9023-2 - 2020/07/17 (金) 14:14:23 - k
松浪

接着力の強い剥離防止コートスライド(凍結切片用) 削除/引用
No.9023-1 - 2020/07/16 (木) 11:30:33 - 粘り腰

凍結切片の蛍光免疫染色に使用するスライドグラスについて教えて下さい。

これまで使用していたThermo ScientificのSuperFrost Ultra Plusが入手できなくなり、代替品にて一部のサンプルで剥離が生じて困っております。

条件の概要は下記のとおりです。

@未固定マウス腫瘍をOCTに包埋、凍結
A薄切 (7〜10μm厚、クリオスタットの温度は種々検討中)
B風乾 1h
Cアセトンまたはアセトン+メタノール固定 数分
D風乾 30min
Eブロッキング→染色→封入

染色中にどこかで剥離が生じ、早いものではブロッキング液載せた段階で剥がれます…

もちろんCで2%ホルマリン数分固定にすれば剥がれないのですが、染色性が落ちそうな抗体がいくつかあるのでできれば避けたいところです。


未固定試料をアセトン等で固定するケースで接着力の高い剥離防止コートスライドをご存知でしたら教えて下さい。

よろしくお願いいたします。

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