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(無題) 削除/引用 No.11105-2 - 2023/01/11 (水) 22:54:37 - うがっつ GSTの配列も追記します tcccctatactaggttattggaaaattaagggccttgtgcaacccactcgacttcttttggaatatcttgaagaaaaatatgaggagcatttgtatgagcgcgatgaaggtgataaatggcgaaacaaaaagtttgaattgggtttggagtttcccaatcttccttattatattgatggtgatgttaaattaacacagtctatggccatcatacgttatatagctgacaagcacaacatgttgggtggttgtccaaaagagcgtgcagagatttcaatgcttgaaggagcggttttggatattagatacggtgtttcgagaattgcatatagtaaagactttgaaactctcaaagttgattttcttagcaagctacctgaaatgctgaaaatgttcgaagatcgtttatgtcataaaacatatttaaatggtgatcatgtaacccatcctgacttcatgttgtatgacgctcttgatgttgttttatacatggacccaatgtgcctggatgcgttcccaaaattagtttgttttaaaaaacgtattgaagctatcccacaaattgataagtacttgaaatccagcaagtatatagcatggcctttgcagggctggcaagccacgtttggtggtggcgaccatcctccaaaa 3xFLAGとGSTの間にはBamHIが入ってます。 コザックはgccacc で直後にATGです。

FLAGtag付きのタンパク質が検出できません 削除/引用 No.11105-1 - 2023/01/11 (水) 22:50:25 - うがっつ CAG promoterの下で　3xFLAG-gccacc-GST-GeneXを発現させるPlasmidを作成しました。 HEK293Tにトランスフェクションし、タンパク質を回収した後にWBを行いました。 GeneXに対する抗体では目的の蛋白質が検出できましたが、FLAGに対する抗体では検出できませんでした（ポジコンとして他のFLAG融合タンパクをロードした際には検出できました）。 つまりover expressionとWBはうまくworkしていることが推察されます。 しかしながら、FLAGが検出できない問題として何が考えられますでしょうか？ FLAGtagは下記の配列を使用しています。 gactacaaagaccatgacggtgattataaagatcatgacatcgattacaaggatgacgatgacaag また、sequence確認では、全長が正しい配列になっていました。 宜しくお願い致します。

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