初歩的な質問で恐縮ですが、
どうしても解決できないのでこちらに投稿させていただきます。
２％アガロースゲルを電気泳動で用いるのですが、
そのゲルが上手く作れず困っております。
以下の三点には問題ないことがわかっています。
一、PCRについて
ラダー自体が不鮮明あるいは検出されないことと、
先輩の作ったゲルでは同じ時に作ったPCR産物の
バンド、ラダーともに現れています。
二、試薬の種類と量
バッファーとアガロースの種類と量に関しては、
同じもので先輩のゲルが上手くできています。
三、トレイに流し込む工程
トレイに流し込みコームを挿す工程は
先輩と一緒に作成し成功したことから
ゲルにムラができ、またウェルが破れたり
ということもありません。
充分にアガロースが溶けていないのかと思い、
低圧力でしっかり溶解させているつもりですが
それでもだめでした。
ゲルの作成手順
@ビーカーにアガロースを測りとる。
Aバッファーを加える。
B軽く振り混ぜてから、低圧力で沸騰寸前まで温め溶かす（途中、何度か取り出し振り混ぜる）。
Cビーカーにラップのついた状態で重さを測り、蒸発した分と＋α蒸留水を加える。
D高圧力で沸騰させ、もとの重量になるまで蒸発させる。
先輩と一緒にゲルを作って頂いた時も、
全く同じ操作で作成しバンドとラダーがクリアに検出されました。
しかし自分で作成するとどうしてかラダーすら不鮮明になってしまいます。
これまでゲルを何度も作成し電気泳動をしてきましたが、こんなことにはならなかったためバッファーも疑いましたが、どうやら私の溶かす工程に問題がありそうです。
もしも何かこの失敗にお気づきの点がありましたら、
どうかお手を貸していただきたく思います。
それでは長くなりましたが、よろしくお願い致します。 |
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