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(無題) 削除/引用 No.5607-10 - 2016/12/13 (火) 08:49:21 - み 抗体を節約したければハイブリバックに背中合わせに2枚重ねて入れてやるとか容器以外のものを考えるのも良い。 パラフィルムの上に抗体液を滴下しておいて、その上に膜を被せるとか。

(無題) 削除/引用 No.5607-9 - 2016/12/13 (火) 06:07:56 - おお みなさんありがとうございました。やはりわたしがかんがえてた懸念が、、、 いま１０枚弱いっぺんにということで、このQを上げたときからまとめて一つの容器でやってみている最中です。O/Nインキュベーションで膜が浮いてくるほどあればなんとかなっているような気がしています。２次抗体は３時間ほど。 ３枚程度だったら分けてやったほうがいいですね。

(無題) 削除/引用 No.5607-8 - 2016/12/12 (月) 23:54:09 - toto APさんのように私もコロニーハイブリで何枚も一つのバッグに入れてやってた口ですが、シグナルが特異的に検出できたのは、ハイブリの場合は温度が高いので反応速度が十分稼げたからではないですかね。それで室温や、まして4度では複数枚を入れると結合反応が進まないのでうまくシグナルが得れないのではという気がします。37度とかでやるとましになるのかもしれません。やったことないですが。

(無題) 削除/引用 No.5607-7 - 2016/12/12 (月) 23:42:25 - WB乙 ムラになったり、バックが汚くなったりしたことがあったのでやってません。とくに抗体がバック上がりやすいのだとこの傾向は顕著になります。なので、タッパー１個にメンブレン１枚でやってます。大きめのタッパーなら２枚くらいなら大丈夫とおもいます。

(無題) 削除/引用 No.5607-6 - 2016/12/12 (月) 13:10:11 - AP プラークハイブリのときは、一回に数十プレートのレプリカを扱ったりするので、ハイブリ液やプローブも節約したいのもあって（RIプローブなんかだと特に）、かなり窮屈に重ねてました。しかし、ムラがあろうとなんだろうとシグナルが確認出来ればよく、オートラ／染色像は通常、論文に載せて人様に見せるものでもないですから、それで良かったのです。

(無題) 削除/引用 No.5607-5 - 2016/12/12 (月) 13:06:02 - AP 液量が少なくメンブレンが自由に泳がない状態で、文字通りスタックしていると、重なったところとそうでないところで染まり具合、バックグラウンドが違ってきます。大きさの違うメンブレンなんかだと、大きい方のメンブレンに小さいほうが乗ったあとが如実にわかったりします（周りより薄染）。大きさの揃ったメンブレンを揃えて重なればムラにはならないでしょうが、重ねなかった時より染まりが悪くなっている可能性が、

(無題) 削除/引用 No.5607-4 - 2016/12/11 (日) 23:13:08 - ポスドク 私もalphaさんと同じ印象です。一度に二枚を何度かやりましたが、これじゃ定量には使えないなあ、と。 溶液がたっぷりで、メンブレン同士がぺったり張り付かずにそれぞれが溶液中を離れて泳いでいるような感じでやった時はうまくいきましたが、途中で張り付いてないかチェックしたりしなきゃならない位なら、それぞれ独立でやった方が楽だな、と。そもそも抗体液をたっぷりにしたら、なにがしたかったのかわからないですし。 ノザンなんかはメンブレンを何枚も重ねてやってもうまくいっていたんですけど、ウェスタンでは駄目でした。

(無題) 削除/引用 No.5607-3 - 2016/12/11 (日) 21:59:01 - ごん 数年前まで一つの容器に一つのメンブレンを信じてやっていましたが、 友人が２，３枚同時にやっているのを見て自分でも試してみた結果、 まったく問題はなかったです。 むしろ抗体の節約に世の中の研究者はみんな複数のメンブレンでやってる と思っていました・・

(無題) 削除/引用 No.5607-2 - 2016/12/11 (日) 17:30:18 - alpha 正直、ムラがあるような検出でした。 そのときは、試しにローディングコントロールを３枚？ほどまとめて反応させてみましたが、同じメンブレン上でかなりバンドに影響が出ました。 メンブレン同士が張り付いてしまっていたのでしょうか？ 私自身の手技が問題だったかもしれません。 あくまで感覚ですので、ご参考程度に。

WBで複数のメンブレンを一つの容器で抗体を反応させる 削除/引用 No.5607-1 - 2016/12/10 (土) 12:57:58 - おお WBで複数のメンブレンを一つの容器で抗体を反応させたりしていますか？三枚とか四枚とか、、、 それぞれのメンブレンに均一に浸透してくれるかなぁとちょっと思ったりしますが、まあ膜は0.2umのポアサイズで抗体からしてみればスカスカとも言えるでしょうし、、、 実際にファージのゲノムライブラリーのプラークのハイブリではうん十枚重ねた状態でやったりするようですが、、、 ご経験のある方、感触などでもいいですから教えていただけませんか？

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