Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

21件 ( 21 〜 21 )  | 次  1/ 1. 2. /2


プラスミドとインサートの大きさについて 削除/引用
No.6775-1 - 2018/03/18 (日) 04:49:52 - りんご
最近プラスミド関連の投稿が多いなと思いつつ、明日はわが身で、私もプラスミド構築の質問なのですが、、、

3.7kbの親プラスミドのマルチクローニングサイトに、XhoI・NotIで処理した3.1kbのPCR断片を挿入したいと思っています。
当初の実験で失敗(トランスフォーメーション後のコロニー8個中、8つともインサートなし)したため、制限酵素処理からやり直し、ライゲーションのモル比も1:1〜7で振ってやり直しましたが、やはりあたりのコロニーが得られませんでした。
次の策を考えているところなのですが、そもそも、3.7kbの親プラスミドに3.1kbのインサートを入れるのは、大きさ的にやや難しい実験計画と言えるでしょうか?
PCR断片を2つに分け、段階的に入れる、もしくはもっと大きい親プラスミドの方が入れやすい様であれば、親プラスミドの変更も考えたいと思います。

小さい断片のクローニングはある程度の経験があり、2回目の実験では特に慎重に実験をしたつもりですが失敗してしまい、次は何かしらの手を変えたいと思っています。皆様、宜しくお願いいたします。

21件 ( 21 〜 21 )  | 次  1/ 1. 2. /2


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。